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溪黄草,具有清热利湿、退黄祛湿、凉血散瘀的功效,常用于治疗急性黄疸型肝炎、急性胆囊炎、痢疾、肠炎、跌打瘀痛等病症。作为我国民间习用的抗肝炎草药,不仅具有广泛的药用价值,而且还是一味市场潜力极大的保健药品,因此溪黄草具有广阔的开发应用前景。 溪黄草中化学成分复杂,研究和应用其中的有效成分,可以将其有效成分提取出来并进一步分离纯化,对得到的有效单体进行药效研究。本论文以溪黄草为研究对象对其有效成分进行提取、分离纯化和结构鉴定,主要研究内容如下: (1)溪黄草有效成分提取方法的优化:采用加热与超声提取技术相结合的提取方法,探究了温度、溶剂的种类、溶剂的比例对提取物含量及分布的影响,并对茎、叶两部分提取物含量及分布进行对比。实验结果表明:水提取时,温度越高,提取物含量越高;按照溶剂极性大小(水>甲醇>乙醇)依次改变溶剂的比例,提取物的分布呈现出与溶剂极性大小相一致的规律;同一提取条件下,茎、叶两部分提取物相似,但叶部分所含化合物数目多于茎部分,且含量亦高于茎部分。 (2)采用石油醚索氏回流提取溪黄草提取物中低极性化合物,采用大孔树脂吸附富集溪黄草提取液中的高极性化合物,分别得到溪黄草提取物的石油醚部分和水层部分。利用柱色谱、色谱塔技术和低、中、高压制备型液相色谱技术分别对这两部分中具有较强紫外吸收的化学成分进行分离纯化,以HPLC为检测手段分离得到了溪黄草中八个单体成分,石油醚部分分离出三个化合物经HPLC检测其纯度分别为:93%,91%,92%,水层部分分离出五个化合物经HPLC检测其纯度分别为:99%、99%、98%、98%、93%。 (3)应用紫外吸收光谱(UV)、红外光谱(IR)、电喷雾串联质谱(ESI-MSn)、核磁共振氢谱(HNMR)、核磁共振碳谱(13C-NMR)对分离出溪黄草中的单体化合物进行结构研究,结合参考文献及谱图鉴定出水层部分四个化合物,分别为:芹菜素-6,8-二-C-毗喃葡萄糖苷、异夏佛托苷、夏佛托苷、迷迭香酸,其中芹菜素-6,8-二-C-毗喃葡萄糖苷、异夏佛托苷、夏佛托苷,这三个化合物为首次在溪黄草中发现。 本文利用柱色谱、色谱塔技术和低、中、高压制备型液相色谱技术对溪黄草提取物的石油醚部分和水层部分进行分离纯化,并对分离得到的单体成分进行结构鉴定,发现了溪黄草中三个新的黄酮碳苷化合物。此外,通过实验研究,进一步验证了复杂的天然产物样品的分离纯化思路:先采用分段粗分的办法,将初提物粗分为中等复杂体系或简单体系后再进行精分,最后通过制备型高压液相色谱得到单体化合物。