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Peroxiredoxin II（Prx II）是一种典型的含有2个半胱氨酸残基的过氧化物还原酶,广泛表达于哺乳动物的细胞质基质和细胞质膜上,具有清除细胞内活性氧（ROS）的作用,并参与细胞内多条信号传导通路调控细胞的增殖、衰老和凋亡。病理条件下由于活性氧的产生和清除失衡,常常会造成活性氧对机体组织、器官的损伤。酒精在肝脏代谢过程中会产生大量的活性氧,氧化应激引起细胞内AKT磷酸化水平的下降诱导肝细胞发生凋亡,导致肝脏组织的损伤。我们前期的研究结果显示Prx II可以抑制细胞氧化应激时通过AKT信号传导通路发生的细胞凋亡,且在肝脏组织中高表达,因此本文采用体外构建稳定遗传的L02-shPrx II人正常肝细胞系,检测Prx II在酒精损伤肝细胞过程中的保护作用,研究Prx II在酒精诱导肝细胞凋亡过程中调控AKT信号转导通路的相关分子机制,并通过建立Prx II基因敲除鼠酒精肝损伤模型确认Prx II对酒精肝损伤的保护作用,为酒精性肝病的预防和治疗提供基础理论依据。通过检索文献筛选人Prx II基因敲降序列,通过NCBI数据库比对确认后构建稳定遗传L02-shPrx II人正常肝细胞系;利用荧光显微镜、流式细胞术和蛋白质免疫印记法等方法检测敲降效果;通过MTT-assay方法绘制细胞增殖曲线;利用流式细胞术检测酒精对L02-shPrx II细胞周期的影响;利用Annexin V-PE染色通过荧光显微镜检测酒精诱导的细胞凋亡;以DHE为荧光染料利用荧光显微镜检测酒精处理后细胞内活性氧水平;通过蛋白质免疫印记法方法检测酒精诱导肝细胞发生凋亡的相关信号转导通路变化,筛选出Prx II调控的相关信号靶标蛋白;通过加入靶标蛋白激动剂,检测细胞的凋亡水平变化、活性氧水平变化;通过加入活性氧的抑制剂N-乙酰-L-半胱氨酸,检测细胞的凋亡水平变化、活性氧水平变化。体内实验采用Prx II基因敲除鼠建立酒精肝损伤模型,利用PCR鉴定小鼠基因型,制造酒精性肝损伤小鼠模型,采集小鼠肝脏组织制作石蜡切片,通过H&E染色观察肝组织病理学变化。利用荧光照相检测慢病毒转染率达95%以上,Prx II表达水平显著下降,可以用于后续实验;通过MTT-assay筛选酒精处理浓度为400 mM时,L02 shPrx II细胞存活率显著低于shCONT细胞;酒精处理后,L02 shPrx II细胞SubG0期细胞增多,G1期减少,且差异显著;荧光成像结果显示,酒精诱导L02 shPrx II细胞发生细胞凋亡数量显著高于shCONT细胞,酒精诱导L02-shPrx II细胞内活性氧水平显著高于shCONT细胞;蛋白质免疫印记法结果显示:Cleaved-caspase12、Cleaved-caspase3表达水平在酒精处理L02-shPrx II细胞中显著升高,AKT磷酸化水平显著下降,AKT下游信号蛋白?-catenin磷酸化水平显著升高,抗氧化蛋白HO-1表达水平下降;加入AKT激动剂FGF2有效抑制酒精诱导的肝细胞凋亡以及活性氧水平升高;同时体内结果显示,酒精诱导Prx II-/-小鼠肝脏脂肪空泡显著多余野生型小鼠。以上结果表明,Prx II能够清除肝细胞在代谢酒精过程中产生的活性氧,通过调控细胞内活性氧介导的AKT信号通路抑制酒精诱导的L02肝细胞凋亡,为酒精性肝损伤的预防和治疗提供潜在的分子靶标。