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本研究以采自云南中部地区,昆明西山、昆明野鸭湖、昆明金殿、嵩明大哨和楚雄紫溪山的野生蛹虫草分离所得的蛹草拟青霉菌株,以及菌株来源于我国东北地区沈阳居群、菌株原产于我国东北地区的东北居群-1和东北居群-2的蛹草拟青霉菌株,在人工培养下所得的菌丝体为研究的试验对象,以野生蛹虫草和冬虫夏草为对比。对各居群菌丝体虫草多糖、虫草酸(D-甘露醇)、总黄酮、尿嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷、腺嘌呤、腺苷、虫草素等功效性成分进行测定分析。运用描述性分析、巢氏设计方差分析、单因子方差分析及多重极差比较等统计方法,揭示滇中地区蛹虫草功效成分的分布式样,比较其功效成分含量的差异,为规模化选育和培养不同活性成分的蛹虫草及其菌丝体提供基础资料。研究结果概括如下:
本研究表明,不同生态地理来源的蛹草拟青霉地区间、同一地区内不同居群间,同一居群内不同菌株间的功效成分分布式样差异显著,各种功效成分的分布式样存在明显分化。巢氏设计方差分析结果表明,各功效成分地区间方差分量占总分量的0.00%~63.34%,各功效成分居群间方差分量占总分量的2.01%~36.75%,各功效成分菌株间方差分量占总分量的19.62%~87.91%。
经过人工选育培养的蛹草拟青霉菌丝体部分功效成分能得到显著的提高。蛹草拟青霉菌丝体和野生蛹虫草对比结果表明,经过人工培养的蛹虫草菌丝体多糖、黄酮、尿嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷和虫草素含量要高于野生蛹虫草;而甘露醇和腺嘌呤含量则要低于野生蛹虫草。
单因素方差分析结果表明,菌丝体菌株来自我国东北地区的沈阳居群(SY)、东北居群-1(YX)和东北居群-2(ZD)的多糖(9.44±4.10 mg/g)、虫草酸(D-甘露醇)(48.21±9.25 mg/g)、总黄酮(18.69±3.75 mg/g)、尿苷(315.53±127.60 ug/g)、鸟苷(368.60±177.04 ug/g)、腺苷(492.06±144.50 ug/g)平均含量,要低于其他来源于云南省中部地区的菌丝体菌株的多糖(48.61±38.49 mg/g)、虫草酸(D-甘露醇)(59.24±22.06 mg/g)、总黄酮(20.69±3.86 mg/g)、尿苷(439.36±333.15 ug/g)、鸟苷(480.25±208.94 ug/g)、腺苷(576.52±186.82 ug/g)平均含量,差异显著;而肌苷(10.60±15.25 ug/g)和腺嘌呤(74.20±29.26 ug/g)平均含量,则要高于菌丝体菌株来源于云南省中部地区的菌丝体菌株的肌苷(1.07±4.33 ug/g)、腺嘌呤(22.75±20.67 ug/g)平均含量,差异显著;尿嘧啶和虫草素两个地区间无统计学差异。
居群间多重极差比较结果表明,嵩明居群(SM)菌丝体的多糖、虫草酸(D-甘露醇)含量最高,分别为70.65±39.37 mg/g和78.10±16.74 mg/g,金殿居群(JD)总黄酮、鸟苷、腺苷含量最高,分别为23.29±4.04 mg/g、725.20±203.39 ug/g和744.98±172.37 ug/g,沈阳(SY)居群菌丝体尿嘧啶含量最高,为209.97±112.36 ug/g,野鸭湖居群(YY)尿苷含量最高,为507.91±232.33 ug/g,东北居群-1(YX)菌丝体肌苷、腺嘌呤和虫草素含量最高,分别为18.21±23.57 ug/g、100.26±23.91 ug/g和9878.02±2417.65 ug/g。
菌株多重极差比较结果表明,嵩明居群(SM)cmilSM5号菌株,其多糖(172.15±5.07 mg/g)、虫草酸(115.96±3.31 mg/g)、尿苷(2311.26±40.39 ug/g),东北居群-1(YX)的cmilYX8号菌株的肌苷(78.64±25.05 ug/g),cmilYX6号菌株的腺嘌呤(130.98±8.34 ug/g),野鸭湖居群(YY)的cmilYY6号菌株虫草素(20748.21±853.66ug/g),西山居群(XS)的cmilXS2号菌株腺苷(889.01±102.07 ug/g),金殿居群的cmilJDD2号菌株鸟苷(842.06±6.29 ug/g),沈阳居群(SY)的cmilSY16号菌株尿嘧啶(472.76±11.79 ug/g),东北居群-2(ZD)的cmilZD3号菌株总黄酮(31.37±9.53 mg/g)分别为所有菌株间最高。
依据不同地理种源,同一地理种源不同个体的蛹虫草菌株各种功效成分含量分布式样有差异的特点,在进行蛹虫草的人工规模培养化菌株选育、蛹虫草及其菌丝体不同功效成分含量的产品生产时,可根据需要选取不同居群、不同的菌株进行筛选。云南地区蛹草拟青霉居群多糖、虫草酸(D-甘露醇)、总黄酮、尿苷、鸟苷、腺苷平均含量较高,可以作为高产菌株人工选育的菌种来源,而我国东北地区蛹草拟青霉居群肌苷、腺嘌呤平均含量则较高,可以作为这两种功效成分高产菌株人工选育的菌种来源,上述单一功效成分最高的菌株则可作为功效成分高产的优质菌株。