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急性肺损伤(Acute Lung Injury,ALI)是呼吸系统的危重病,对其的防治是医疗领域的一项重大难题。目前认为,炎症反应失控、Ⅱ型肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cells,AEC-Ⅱ)过度凋亡、肺上皮细胞和血管内皮细胞生理屏障破坏引起肺泡通透性增加和凝血途径的异常激活是ALI/ARDS病理发生的主要特征[1,8-10]。然而其发病机理异常复杂,尤其是分子调控机制,迄今知之甚少。因此,深入了解ALI的分子调控机制,不仅对于理解ALI的病理特点非常重要,也将为从不同水平、不同发病阶段针对不同靶点采取新的干预措施提供新的线索。MTA1是MTA超家族成员之一,主要功能是与靶基因结合并使靶点发生乙酰化,调节基因转录。为了更好的理解这一蛋白修饰物的分子生物学功能,我们在实验中观察到MTA1在LPS诱导的小鼠肺组织中异常高表达,结合文献报道[10],我们推测它在LPS诱导的ALI/ARDS阶段可能发挥了重要作用。本实验首先构建稳定的小鼠ALI/ARDS动物模型,探讨MTA1表达对ALI/ARDS小鼠肺病理改变状况、炎症因子变化及肺泡上皮细胞凋亡状况的影响,并探讨MTA1的调控作用机制,进一步明确它在ALI/ARDS中表达的意义。本实验分为两部分:第一部分:MTA1在LPS所致小鼠ALI过程中的表达变化目的:研究正常小鼠肺组织以及LPS诱导的ALI/ARDS模型18h后MTA1的表达状况;分析正常及ALI小鼠肺组织IL-1b,IL-6,TNF-a及IL-10表达状况。方法:健康成年雌性C57B/6小鼠20只(体重20-30g)随机分为2组,实验组(ALI组)10只,对照组(正常小鼠)10只。饲养7天以适应环境后,实验组小鼠气管内滴入800μg大肠杆菌内毒素脂多糖(LPS)溶液,18h后处死动物。免疫组织化学染色和Western-Blot检测肺组织中MTA1表达状况;RT-PCR检测肺组织中炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6及IL-10表达状况。结果:(1)实验组小鼠气管内滴入800μg LPS溶液18h后,肺组织病理改变达到ALI的病理诊断标准。(2)免疫组化显示小鼠肺组织中MTA1主要表达于肺泡上皮细胞(AECs)胞核中,Western Blot显示ALI小鼠肺组织MTA1表达增高。(3)RT-PCR显示:ALI小鼠肺组织中IL-1β、TNF-α、IL-6及IL-10表达上调。结论:MTA1在小鼠肺泡上皮细胞中存在广泛表达;MTA1在LPS诱导的ALI小鼠肺组织表达上调。第二部分:MTA1抑制对小鼠ALI发生发展的影响及相关机制目的:抑制MTA1的表达对LPS诱导的ALI病理改变、炎症因子的表达、NF-κB及肺泡细胞凋亡的影响,探讨MTA1对ALI的调控机制。方法:健康成年雌性C57B/6小鼠50只随机分为5组,正常组(Naive组)10只、单纯Ctrl Si RNA处理组(Ctrl Si RNA)10只、单纯Mta1 Si RNA处理组(Mta1 Si RNA)10只、Mta1 Si RNA联合LPS处理组(Mta1 Si RNA+LPS)10只、Ctrl Si RNA联合LPS处理组(Ctrl Si RNA+LPS)10只。在LPS处理小鼠前24h将40μg溶解稀释的Mta1-Si RNA经小鼠尾静脉注入动物体内,采用Ctrl Si RNA作为对照。LPS处理18h后,观察肺组织病理损伤学改变,检测各组肺组织MTA1的表达状况,DPI-ELISA检测肺组织NF-κB活性及肺泡上皮细胞凋亡情况;RT-PCR检测各组小鼠肺组织中炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10及肺泡上皮标记物ICAM-1、Ttf-1的表达状况。结果:(1)实验中所用的Mta1Si RNA能有效地抑制小鼠肺组织MTA1的表达水平。(2)与单纯LPS处理组比较,Mta1 Si RNA+LPS处理组肺损伤病理改变明显加重,肺泡萎陷伴大量炎细胞浸润,局部肺泡轮廓消失;NF-κB信号通路活性减低。(3)ALI小鼠肺组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10表达明显上调。与单纯LPS处理组比较,Mta1 Si RNA+LPS处理组肺组织中IL-1β、TNF-α、IL-6表达明显增加(P﹤0.05);IL-10表达与单纯LPS处理组比较无统计学差异(P>0.05);(4)在ALI小鼠肺组织中ICAM-1、Ttf-1表达均受到明显抑制;抑制MTA1表达后Ttf-1表达进一步降低(P﹤0.05),而ICAM-1无明显变化(P﹥0.05);(5)抑制MTA1表达后,AEC凋亡增多。结论:降低内源性MTA1后:(1)LPS诱导的ALI小鼠肺损伤明显加重,NF-κB信号通路活化受到抑制,炎症介质IL-1β、TNF-α、IL-6表达增加,而对IL-10表达无明显影响。(2)AEC凋亡明显增加,Ttf-1(AECⅡ标志物)表达进一步减低而对ICAM-1(AECⅠ标志物)无明显变化,提示以AEC II减少为主。