Hepcidin是一种由肝脏表达的富含半胱氨酸残基的小分子肽，对于调节机体铁离子代谢平衡发挥着重要作用。与许多富含半胱氨酸的抗菌肽类似，hepcidin同样具有广谱的抗菌作用。本文对构建的分泌表达人hepcidin巴斯德毕赤酵母重组pPICZα A-Hepc菌株的高表达发酵条件进行优化，研究了重组人-hepcidin的纯化工艺，通过抑菌及小鼠内皮细胞的转染实验证实酵母表达重组人-hepcidin25具有抗微生物活性及调节细胞内铁代谢活性。 巴斯德毕赤酵母作为外源蛋白表达系统有很多优点，但也有其不足之处，比如产量普遍较低。提高产量，除了可选用强启动子，使用酵母偏爱的密码子及外源基因高拷贝整合等方法，在发酵过程中控制生物反应状态，使细胞生长至高的密度并使细胞生理状态维持高的活力，以获得尽可能多的产品也至关重要。针对这一问题，本文优化巴斯德毕赤酵母发酵培养基的组成以及培养条件，考察了不同培养基C源N源对细胞生长及外源基因表达的影响。在摇瓶中，对发酵条件进行了研究．发现较适合的培养条件为：基础发酵培养基以葡萄糖20g/L为碳源，蛋白胨20g/L，0．1mol/L磷酸钾缓冲，起始pH6．0，250 ml摇瓶装液量25ml，生物素4×10-4g/L，YNB13．4g/L（同比总体积量分批加入诱导培养基），甲醇诱导浓度0．5%，发酵3d后，目的蛋白产量可达150mg/L。 对重组毕赤酵母（Pichia pastoris）分泌至胞外存在于发酵液的hepcidin进一步分离纯化，选用等电沉淀，硫酸铵分级沉淀，阴离子交换层析，阳离子交换层析，凝胶过滤纯化，反相色谱纯化等步骤，确定纯化工艺为等电沉淀，凝胶分子筛层析，反相色谱精纯，得到的目的蛋白电泳检测样品呈现单一条带，纯度不低于90%。质谱分析重组hepcidn分子量与计算一致，CD光谱证实重组hepcidin结构与天然类似。 通过抑菌实验、转染小鼠内皮细胞w estern blot检测胞内GFP-FPN1及TfR1的变化测定重组hepcidin的生理活性。研究发现重组hepcidin具有抗菌活性，对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌抗菌效果明显，对大肠杆菌无明显作用效果。转染内皮细胞证实重组hepcidin可影响内皮细胞GFP-FPN1及TfR1的表达；通过流式细胞仪检测了重组hepcidin-25处理不同时间后细胞LIP的变化。实验证实酵母表达的重组hepcidin具有调节铁代谢活性，对研究hepcidin与铁代谢的相关分子吸收机制及药物开发应用奠定了基础，对潜在的医学诊断治疗具有重要意义。