色谱饼的优化设计及其在生物工程中的应用

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该论文内容分为三个部分。 1.以评价色谱柱的方法对色谱饼进行了评价,发现用于分离生物大分子的疏水填料并不遵循分离小分子填料的规律。另外,仍以短柱理论为理论基础,在原液流分布器(以下简称分布器)的基础上设计出多种液流分布器,并用不同的方法对液流分布器的合理性进行了判断,挑选出对液体分布性能更好的分布器,使其吸附量在容量因子k′=10.54时比原分布器提高约4.43mg,约33.8%左右。在原装柱方法的基础上,还设计了两种新的装柱方法,其中一种较好的装柱方法吸附量在容量因子k′=9.87时比原装柱方法提高了8.36mg,提高约67.5%。 2.研究了一种弱阴离子交换(WAX)色谱饼对重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)的复性并同时纯化的方法。将大肠杆菌(E.coli)表达的存在于包涵体中的rhG-CSF用脲提取并用巯基乙醇还原变性后,在流动相中有一定浓度的脲及氧化-还原谷胱甘肽存在条件下,对rhG-CSF进行复性的色谱条件进行了优化。在30min内可得到纯度95%、比活为1.9×10~8IU/mg的rhG-CSF,质量回收率为27%。该法可在进样时生成沉淀的条件下正常进行色谱操作,并以周期性溶解沉淀的方式,再用WAX色谱饼复性方法提高rhG-CSF的质量及活性回收率。可望普遍用于蛋白质复性及同时纯化工业生产。 3.研究了一种用聚合物基质的WCX色谱饼对重组人干扰素-γ复性并同时纯化的方法,将大肠杆菌(E.coli)表达的存在于包涵体中的rhIFN-γ用脲提取,对rhIFN-γ进行复性的色谱条件进行了优化。在30min内可得到纯度大于97%、比活为4.3×10~7IU/mg的rhIFN-γ,质量回收率为48.9%。相对于文献中报道的方法,该方法步骤少,操作简单。在实验中采用了色谱饼装填聚合物基质的填料,使该种填料有了更为广泛的应用,并提高了色谱饼的吸附量,可望用于工业生产。
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