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目的:研究片仔癀干预对大肠癌细胞体内外生长、转移的影响,同时从miRNA及其靶基因调控、相关信号转导通路活化探讨其调控机制。同时,研究PNO1在大肠癌组织、细胞中的表达及其临床意义,同时探讨PNO1对大肠癌细胞体内外生长的影响及调控机制;进一步研究片仔癀干预大肠癌细胞中PNO1表达的影响。方法:1、构建皮下移植瘤模型并给予片仔癀干预,通过瘤体体积、瘤体重量检测研究片仔癀干预对瘤体生长的影响;采用MTT、集落形成、PI染色检测片仔癀干预对大肠癌细胞增殖、存活的影响;采用QPCR、Western-blot检测片仔癀干预对大肠癌细胞miR-34c-5p及其靶基因表达的影响。2、采用划痕、迁移、侵袭、Western-blot等实验检测片仔癀干预对大肠癌细胞转移的影响;构建大肠癌原位移植瘤模型并给予片仔癀干预,通过小动物活体成像、瘤体重量、转移瘤数量等实验检测片仔癀干预对大肠癌生长和转移的影响;采用迁移、侵袭等实验检测片仔癀干预对HCT-8/5-FU细胞转移的影响;通过Q-PCR、Western-blot研究片仔癀干预对HCT-8和HCT-8/5-FU细胞TGF-β1/miR-200/ZEB1通路的调控作用。3、采用mRNA芯片检测大肠癌癌组织和癌旁组织中基因的差异表达;采用TCGA数据库分析、Q-PCR、Western-blot、免疫组化、cDNA芯片、组织芯片等技术研究PNO1在大肠癌组织、细胞中的表达并分析PNO1表达与大肠癌患者生存期的相关性;采用Q-PCR、Wester-blot检测不同sh-PNO1对大肠癌细胞中PNO1表达的影响;采用高内涵、CCK8、集落形成、PI染色、AnnxinV染色检测PNO1沉默对大肠癌细胞增殖、存活和凋亡的影响;构建皮下移植瘤模型,通过瘤体体积、瘤体重量和GFP荧光强度检测PNO1沉默对瘤体生长的影响;采用mRNA芯片、QPCR和Pathway分析、Western-blot等研究PNO1沉默对相关基因、通路的影响;采用QPCR、Western-blot检测片仔癀干预对大肠癌细胞PNO1表达的影响。结果:1、片仔癀干预显著抑制大肠癌细胞瘤体体积和重量;片仔癀干预显著抑制大肠癌细胞的细胞活力、存活能力和阻滞大肠癌细胞从G0/G1期向S期转化的过程;片仔癀干预显著上调miR-34c-5p的表达,同时下调多个细胞生长、细胞周期相关蛋白c-Myc、CDK4和CyclinD1在mRNA和蛋白水平的表达。2、片仔癀干预显著抑制大肠癌细胞的迁移和侵袭;片仔癀干预显著抑制大肠癌原位移植瘤生长、转移;片仔癀干预显著抑制耐5-FU大肠癌细胞迁移、侵袭;HCT-8和HCT-8/5-FU分别经不同浓度片仔癀干预后,TGF-β1、ZEB1、N-cadherin的表达显著下调,同时上调E-cadherin和miR-200a、miR-200b、miR-200c的表达显著上调。3、PNO1在大肠癌组织、细胞中的表达显著上调;其高表达与大肠癌患者生存期短密切相关;PNO1沉默显著抑制大肠癌细胞体内外生长,且显著降低大肠癌细胞活力和存活能力,诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡;PNO1沉默显著上调p53及其下游p21的表达;片仔癀干预显著下调PNO1表达。结论:片仔癀通过调控miR-34c-5p及其靶基因表达抑制大肠癌细胞体内外生长;片仔癀通过抑制TGF-β1/miR-200/ZEB1通路抑制大肠癌细胞体内外转移;PNO1在大肠癌组织和细胞中的表达显著上调并与大肠癌患者恶性进展密切相关,PNO1沉默通过上调p53及其下游p21表达显著抑制大肠癌细胞增殖和诱导凋亡从而抑制肿瘤生长的作用,片仔癀干预显著下调PNO1的表达。