论文部分内容阅读
以手术、化疗和放疗为主的综合治疗是目前肺癌的治疗模式。化疗和化疗相关治疗在肺癌的综合治疗中有着重要作用。肿瘤耐药是影响化疗疗效、进而影响肺癌综合治疗的重要因素。肺癌细胞中相关基因的异常表达所导致的肿瘤细胞凋亡障碍是肿瘤耐药的原因之一。Survivin是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族成员之一,其异常表达与肿瘤的发生、发展和药物耐受密切相关,但其在化疗药物所致肺癌细胞耐药过程中的作用目前国内外研究较少。采用有效措施抑制肿瘤细胞内凋亡抑制基因的表达并增强相关药物的作用是目前研究的热点。RNA干扰(RNA interfering,RNA i)是生物体保持其遗传性状稳定和调控后生型突变的一种生理现象。作为一种古老的保守机制,RNA i不仅可抵御外源有害基因入侵,而且可将其作为一种解读基因功能的研究技术,还可能为功能基因组学、基因治疗学等众多领域带来新的突破。目前RNAi在理论上有望成为一种新的肿瘤治疗方案。运用RNAi抑制肺癌细胞中异常表达的Survivin基因并由此增强化疗药物的敏感性可能为肺癌的治疗带来新的思路。目的:通过测定转染Survivin siRNA对肺癌A549细胞Survivin表达的变化以观察Survivin siRNA对肺癌A549细胞Survivin表达的沉默效果;观察转染Survivin siRNA对肺癌A549细胞生物学行为的影响及其对增强肺癌A549细胞吉西他滨化疗敏感性的作用。方法:采用人肺腺癌细胞株A549细胞。将A549细胞分为siRNA转染组、吉西他滨组、siRNA +吉西他滨组、正常对照组。利用人工合成的Survivin靶向小分子干扰RNA(small interference RNA,siRNA)转染A549细胞,以沉默Survivin的表达。采用MTT法检测各组细胞增殖率的变化;采用免疫组化法检测各组细胞内Survivin蛋白的表达变化;采用流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期和存活率的差异。结果:MTT结果显示:siRNA转染组细胞的平均OD值为0.214±0.125,吉西他滨组细胞的平均OD值为0.197±0.009,siRNA +吉西他滨组细胞的平均OD值为0.140±0 .006,正常对照组细胞的平均OD值为0.261±0.161。siRNA转染组细胞的增殖率为(82.03±4.77)% (F=155.681, P =0.000)、吉西他滨组细胞的增殖率为(75.46±3.76)% (F=275.598, P =0.000)、siRNA +吉西他滨组细胞的增殖率为(53.71±2.36)% (F=1.414, P=0.244),可见Survivin siRNA与吉西他滨联合作用进一步增强了对A549细胞增殖的抑制效果,但二者之间无交互作用。免疫组化结果显示:Survivin蛋白染色为棕黄色颗粒,多位于细胞胞浆部,与正常对照组比较,siRNA转染组和siRNA +吉西他滨组细胞的Survivin蛋白的表达强度均明显减弱。可见,转染Survivin siRNA有效沉默了A549细胞内Survivin蛋白的表达;流式细胞仪结果显示:siRNA转染组细胞的存活率为(22.34±3.41)%(F=6.872,P=0.031 ),吉西他滨组细胞的存活率为(10.16±0.61)% ( F=89.520 ,P=0.000),而联合组的细胞的存活率为(4.84±1.99)%(F=0.131,P =0.727);转染组细胞G1期(72.31±0.64)%,(F=7.852, P =0.023),S期(14.58±1.91)% (F=0.900,P =0.371),G2期(13.11±1.27)% (F=21.505,P=0.002);吉西他滨组组G1期(79.55±0.58)% (F=34.310, P =0.000),S期(15.67±1.19)% (F=80.177,P =0.000),G2期(4.78±0.62) % (F=139.884,P =0.000)。联合组细胞G1期(66.79±2.79)% (F=4.462, P=0.068),S期(32.35±2.97)%(F=2.546 , P=0.149,G2期(0.86±0.78)%(F=113.105,P=0.000)。可见,与正常对照组相比,吉西他滨组S期细胞比例增加,G2期稍下降;siRNA +吉西他滨组的细胞周期表现为G2期细胞明显减少,S期细胞比率进一步增加。Survivin siRNA与吉西他滨共同处理A549细胞48小时后,与二者单独作用相比较进一步降低了A549细胞的存活率,增加了吉西他滨对A549细胞的杀伤作用,但二者之间无交互作用。结论:Survivin siRNA可效沉默A549细胞内Survivin蛋白的表达;通过Survivin siRNA沉默Survivin蛋白表达是增加A549细胞对吉西他滨化疗敏感性的有效途径。