Syntaxin11是FHL4型疾病的病人所缺失的一种蛋白,其在NK细胞的胞吐过程中具有重要的作用。该蛋白分子缺失时会对NK细胞的胞吐作用造成很大的影响,进而影响NK细胞在天然免疫中的功能。这是FHL4型疾病的根本原因。但是临床上对FHL4型病人进行治疗时,发现大剂量的IL-2可以有效的缓解病人的情况,部分恢复NK细胞的杀伤活性。这为该疾病的治疗提供了一定线索,本课题对大剂量IL-2恢复缺失syntaxin11的NK细胞的杀伤活性的机制进行了一定的研究。　　目的:　　以缺失syntaxin11的NK92细胞为研究对象,观察大剂量的IL-2作用于缺失syntaxin11的NK细胞部分恢复其杀伤活性的现象,探讨其中相关的调控机制。　　方法:　　首先,用syntaxin11 siRNA转染NK92细胞,干扰syntaxin11的表达。进而观察NK92细胞内细胞毒性物质的含量,运输细胞毒性物质的相关分子的含量以及NK92细胞分泌细胞毒性物质的能力的变化。　　其次,为了解大剂量IL-2对缺失syntaxin11分子的NK细胞胞吐过程的影响,我们构建了Rab27a表达载体。　　最后,通过提取NK92细胞内的溶酶体蛋白、细胞浆蛋白和细胞器蛋白,以及分别用EGTA和BFA对NK92细胞作用后,对不经溶酶体分泌的35KD的颗粒酶B进行了一定研究。　　结果:　　1、建立了模拟FHL4型病人NK细胞的模型　　Syntaxin11 siRNA转染的NK92细胞内的syntaxin11分子基本上完全消失, NK细胞杀伤靶细胞的能力下降。然后经过300U/ml IL-2刺激,NK92细胞杀伤靶细胞的能力恢复。　　2、检测大剂量的IL-2作用的缺失syntaxin11的NK92细胞内的相应分子的含量变化　　300U/ml IL-2刺激缺失syntaxin11的NK92细胞后,使其细胞内的PFN的mRNA含量,GrB的蛋白含量和syntaxin7的mRNA含量增多。　　3、DsRed C1-Rab27a真核表达载体构建　　成功构建DsRed C1-Rab27a真核表达载体,但是该质粒转染NK92细胞后的表达率过低(小于1％)。　　4、对于35KD的颗粒酶B的研究　　证实NK92细胞内和上清中都含有35KD的颗粒酶B,并且其在NK92细胞内的定位和32KD的颗粒酶B不同。通过EGTA抑制NK92细胞的胞吐,证实35KD的颗粒酶B和32KD的颗粒酶B释放途径不同。通过颗粒酶B与其底物进行的酶促反应证实35KD的颗粒酶B没有丝氨酸蛋白酶的活性。最后发现,在NK细胞杀伤过程中35KD的颗粒酶B也可以进入靶细胞,并且发挥一定的杀伤功能。　　结论:　　大剂量的IL-2作用于缺失syntaxin11的NK92细胞会使其细胞内相应的细胞毒性物质含量以及运输这些物质的分子发生相应的变化从而恢复NK92细胞的杀伤活性。为了进一步研究这其中的机制,我们构建了DsRed C1-Rab27a真核表达载体。与此同时,我们发现在NK92细胞中存在着分子量大小,细胞内定位,分泌途径等方面都与32KD颗粒酶B不同的,但是也同样具有杀伤活性的35KD颗粒酶B,这也可能与NK92细胞杀伤活性的恢复有关。