三种粉虱瞬时感受器离子通道基因的克隆、表达及在高温胁迫中的功能验证

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温度是影响物种种群动态和扩散分布的重要因素,外来生物得以入侵成功,并暴发成灾,其中一个重要原因是其对温度有较强的抵抗力。由瞬时感受器离子通道(transient receptor potential, TRP)介导的温度感知系统是影响昆虫温度感知的关键组成。研究温度感知机制关键调控因子的功能可为明确温度感知以及温度适应调控机理提供理论依据。本研究以烟粉虱Bemisia tabaci MEAM1隐种、MED隐种及温室粉虱Trialeurodes vaporariorum为研究对象,重点研究克隆了粉虱的TRP基因及其生物信息学特征,并对其在高温胁迫下的功能进行了深入研究。主要结果和结论如下:1、烟粉虱MEAM1隐种、MED隐种及温室粉虱TRP基因的克隆本研究采用反转录PCR和RACE技术,首次克隆获得烟粉虱MEAM1隐种、MED隐种TRP基因的cDNA全长序列及温室粉虱TRP基因的部分序列。生物信息学分析显示其属于瞬时感受器离子通道家族成员,将其分别命名为MEAM1BtTRP、MED BtTRP和TvTRP。2、温度胁迫下,烟粉虱MEAM1隐种和温室粉虱的TRP基因mRNA表达谱分析本研究通过qRT-PCR分析烟粉虱MEAM1隐种和温室粉虱的TRP基因在不同温度下mRNA的表达水平,结果显示,在低温13℃条件下,两种粉虱TRP的mRNA表达量均明显升高;高温胁迫下,烟粉虱MEAM1隐种的表达量最高的温度比温室粉虱高7℃。3、昆虫纲TRP基因的系统发育分析构建系统发育进化树表明昆虫TRP在进化上相对比较保守,三种粉虱的TRP与豌豆蚜TRP2的同源性较高,达到75%,且具有与其相同的氨基酸保守结构域。因此,推测本研究克隆得到的TRP与豌豆蚜的TRP2属同一家族。4、RNAi分析高温胁迫下TRP基因在烟粉虱MEAM1隐种中的作用通过饲喂MEAM1BtTRP基因的dsRNA,发现烟粉虱MEAMl隐种高温耐受力下降,表现为高温胁迫下死亡率显著升高,说明MEAM1BtTRP基因在烟粉虱MEAM1隐种高温适应性方面起关键作用。
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