绞股蓝和黄芪中黄酮类活性物质的提取、纯化及体外活性研究

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槲皮素、商陆素和山奈素是绞股蓝中的主要活性物质,毛蕊异黄酮和芒柄花素是黄芪中的主要活性物质,它们都是黄酮类化合物,具有较多的药理作用。本文主要由六部分组成。  第一部分:绞股蓝中槲皮素、商陆素和山奈素的提取工艺优化  建立高效液相色谱检测绞股蓝中三种物质含量的方法,采用加热回流法,以甲醇为溶剂,利用盐酸把芦丁、商陆苷、和山奈苷分别水解为槲皮素、商陆素和山奈素。通过单因素实验和正交试验优化提取条件,得到最佳提取条件为甲醇浓度100%,盐酸浓度1.5mol/L,料液比1:30(g/mL),提取1.5h,提取1次。槲皮素、商陆素和山奈素的提取量分别为14.78、0.074和0.051mg/g。  第二部:槲皮素、商陆素和山奈素的纯化及结构确认  利用高速逆流色谱法分离纯化绞股蓝粗提物中的槲皮素、商陆素和山奈素。仪器条件为:转速850r/min,流速2mL/min,检测波长280nm,柱温20℃。纯化槲皮素的双相溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(4:5:4:5,v/v),从164.7mg粗品中获得90.6mg槲皮素(纯度为99.23%,回收率为92.74%)。纯化商陆素和山奈素的双相溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(8:2:5:5,v/v),从50mg粗品中获得0.4mg商陆素(纯度为95.46%,回收率为75.32%)和1.1mg山奈素(纯度为98.78%,回收率为83.59%)。纯化后的提取物经HPLC、UV、熔点测定和红外光谱确认结构。  第三部:槲皮素、商陆素和山奈素纯品的体外活性研究  研究槲皮素、商陆素和山奈素纯品对DPPH自由基和羟自由基的清除作用。结果表明槲皮素对DPPH自由基和羟自由基的清除能力最强,EC50为6.03和6.27μg/mg,商陆素和山奈素的清除效果稍差,EC50分别为11.38和28.25μg/mg与14.45和24.45μg/mg。用96孔板法研究三种物质对金黄色葡萄球菌、短小芽孢杆菌、大肠杆菌三种细菌及苹果轮纹、棉花枯萎、柑橘炭疽和小麦全蚀四种真菌的抑菌作用,结果表明,在实验浓度范围内,这三种物质抑菌效果不明显。  第四部:黄芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的提取工艺  建立高效液相色谱检测黄芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素含量的方法,采用加热回流法以乙醇为溶剂,利用盐酸把毛蕊异黄酮苷和芒柄花苷分别水解为毛蕊异黄酮和芒柄花素。通过单因素实验和正交试验,得到最佳提取条件为:乙醇浓度100%,盐酸浓度2.5mol/L,料液比1:40(g/mL),提取时间2h,提取1次。毛蕊异黄酮和芒柄花素的提取量为1.116和0.464mg/g。  第五部:毛蕊异黄酮和芒柄花素的纯化及结构确认  利用高速逆流色谱法分离纯化黄芪中的毛蕊异黄酮和芒柄花素,仪器条件为:转速850r/min,流速2mL/min,检测波长280nm,柱温20℃。纯化毛蕊异黄酮的双相溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(3:5:3:5,v/v),从264.9mg粗提物中获得1.2mg毛蕊异黄酮(纯度为93.8%,回收率为77.56%)。纯化芒柄花素的双相溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(4:5:4:5,v/v),从248.9mg粗提物中获得2.0mg芒柄花素(纯度为98.93%,回收率为84.44%)。纯化后的提取物经HPLC、UV、熔点测定和红外光谱确认了结构。  第六部:毛蕊异黄酮和芒柄花素纯品的体外活性研究  研究毛蕊异黄酮和芒柄花素的抗氧化活性,结果表明毛蕊异黄酮对DPPH自由基和羟自由基的清除能力较芒柄花素强,芒柄花素的清除作用不明显。
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