急性酒精中毒,俗称醉酒,是指一次饮入过量乙醇,乙醇在体内的吸收大于代谢,被吸收的乙醇进入血液循环,通过血脑屏障入脑而引起的机体机能异常以及中枢神经抑制的状态[1]。酒精中毒可以不同程度的引起多器官的功能异常及脏器损伤,其中以胃和肝的损伤最为常见。文献报道称高浓度乙醇可直接侵蚀胃黏膜,引起急性胃黏膜炎症,黏膜出现水肿、充血、糜烂、出血甚至溃疡等[2],此外,吸收入体内的乙醇及其代谢产物乙醛等也可引起急性肝组织损伤[3]。近年来,随着生活水平的提高以及膳食结构的改变,酒类产量及饮酒人数逐年上升,酒精中毒所引发的相关疾病的发病率也呈逐年增长的趋势[4]。据世界卫生组织统计,全球每年因为饮酒原因造成死亡人数约250万,是仅次于肿瘤和心血管疾病的第三大公共卫生问题。因此,寻找并研发天然、无毒、有效的具有解酒保肝护胃的药物有着重要的现实意义。蜂蜜是糖的过饱和溶液,是蜜蜂采集开花植物的花蜜或昆虫分泌的甘露,混以自身消化道的分泌物,在体内经过多种转化酶的作用充分酿造,最后贮藏在蜂巢内的甜味物质[5]。蜂蜜成分复杂,含有碳水化合物、维生素、蛋白质、矿物质、有机酸、黄酮、酚酸、酶等200多种化学物质,其中75%以上的成分是糖类,以单糖为主,总糖的90%左右是果糖和葡萄糖[6]。文献报道[7-9],蜂蜜具有解毒、抑菌、抗氧化和抗炎等活性,对治疗肝炎、胃炎、胃溃疡、烧伤、烫伤、便秘等疾病具有一定的疗效。目的本论文以伴有胃黏膜损伤的急性酒精中毒大鼠为实验对象,探讨蜂蜜对急性酒精性胃黏膜损伤的保护作用,并对其机制进行初步探讨,为蜂蜜的深入研究和开发应用提供科学依据和参考资料。方法用一次性灌胃法构建伴有胃黏膜损伤的急性酒精中毒大鼠模型,实验设正常大鼠组、急性酒精中毒大鼠模型组、蜂蜜高浓度(20%)组、蜂蜜中浓度(10%)组、蜂蜜低浓度(5%)组、阳性药物对照组(鼎久解酒护肝护胃口服液)6个组。除正常组外,其余各组均以75%乙醇按10ml/kg灌胃大鼠,30min后,分别给各治疗组大鼠灌胃给药,急性酒精中毒大鼠模型组灌服等体积生理盐水。各处理组大鼠给药2.5h后腹主动脉取血并处死大鼠,立即剖取肝脏和胃,观察各组大鼠组织大体形态并取材,以备检测。1.探讨蜂蜜对急性酒精中毒大鼠胃损伤的保护作用。观察各组大鼠胃黏膜的大体形态及病理形态学变化,比较各组大鼠胃黏膜损伤指数、损伤抑制率以及组织病理学差异,评价蜂蜜对急性酒精中毒大鼠胃黏膜损伤的保护作用。2.探讨蜂蜜对急性酒精中毒大鼠胃黏膜损伤的保护机制。2.1检测各组大鼠胃组织超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活性、丙二醛(Malonaldehyde,MDA)含量,观察蜂蜜是否通过增强胃黏膜的抗氧化能力保护胃黏膜。2.2检测各组大鼠胃组织内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)含量、白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)含量、肿瘤生长因子α(Tumor Necrosis Factor-alpha,TNF-α)含量,观察蜂蜜是否通过降低胃黏膜攻击因子含量保护胃黏膜。2.3检测各组大鼠胃组织前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)含量、生长抑素(Somatostatin,SS)含量、表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)含量,观察蜂蜜是否通过提高胃黏膜保护因子含量保护胃黏膜。2.4检测各组大鼠血清乙醇浓度(Blood Alcohol Concentration,BAC)、肝组织中的乙醇脱氢酶(Alcohol Dehydrogenase,ADH)和乙醛脱氢酶(Acetaldehyde Dehydrogenase,ALDH)活性以及胃组织中的ADH和ALDH活性水平,鉴定蜂蜜是否通过加快酒精代谢保护胃黏膜。3.探讨蜂蜜对急性酒精中毒大鼠肝组织的影响。通过检测各组大鼠血清谷丙转氨酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate Aminotransferase,AST)活性水平以及观察各组大鼠肝脏病理形态学变化,评价75%乙醇10ml/kg一次性灌胃大鼠是否造成肝脏的急性损伤以及蜂蜜是否对肝脏有保护作用。结果1.探讨蜂蜜对急性酒精中毒大鼠胃损伤的保护作用。与正常组大鼠相比,模型组大鼠胃黏膜损伤指数极显著升高(P<0.01);蜂蜜能极显著降低模型组大鼠胃黏膜损伤指数(P<0.01)、减少胃黏膜的充血水肿、出血及炎性浸润。2.探讨蜂蜜对急性酒精中毒大鼠胃黏膜损伤的保护机制。2.1与模型组相比,蜂蜜高浓度组显著提高胃SOD活性(P<0.05),蜂蜜各浓度组极显著降低胃黏膜MDA(P<0.01)含量。2.2蜂蜜能极显著降低模型组大鼠胃黏膜ET-1含量(P<0.01),极显著降低模型组大鼠胃组织IL-8含量(P<0.01),显著降低模型组大鼠胃组织TNF-α含量(P<0.05或P<0.01)。2.3蜂蜜能不同程度的提高模型组大鼠胃组织PGE2含量(P<0.05)和SS含量(P<0.01);各组大鼠胃组织EGF含量无统计学意义(P>0.05)。2.4与正常组大鼠相比,血清乙醇浓度在模型组大鼠中极显著升高(P<0.01);与模型组比较,蜂蜜低、中浓度组大鼠血清乙醇浓度均显著降低(P<0.05),蜂蜜高浓度组大鼠血清乙醇浓度极显著降低(P<0.01);蜂蜜中、高浓度组极显著提高大鼠肝ADH和胃ALDH活性(P<0.01),蜂蜜各浓度组可显著提高胃ADH和肝ALDH活性(P<0.05或P<0.01)。3.探讨蜂蜜对急性酒精中毒大鼠肝组织的影响。模型组大鼠血清ALT、AST活性水平较正常组升高,蜂蜜各浓度组血清ALT、AST活性水平较模型组减低,但均无统计学差异(P>0.05)。病理切片观察表明模型组肝脏损伤较轻,肝细胞以广泛轻度变性水肿为主,胞浆疏松淡染,肝窦受压变窄,肝细胞轻微坏死,未见炎细胞浸润。阳性药物组及蜂蜜各浓度组肝脏病理水肿变性程度较模型组有所改善。结论1.成功建立了伴有胃黏膜损伤的急性酒精中毒大鼠模型,蜂蜜对急性酒精中毒大鼠胃黏膜损伤具有良好的保护作用。2.蜂蜜保护急性酒精中毒大鼠胃黏膜损伤的机制主要有以下几个方面:1)提高胃黏膜SOD活性、降低胃黏膜MDA含量,通过调节和改善自由基代谢、抑制脂质过氧化反应的途径减轻急性胃黏膜的损伤。2)蜂蜜能降低胃黏膜致损伤因子ET-1、IL-8、TNF-α的含量,通过减轻胃黏膜的局部缺血、减少炎性介质、减轻炎性反应的途径保护胃黏膜。3)蜂蜜能提高胃黏膜防御和修复因子PGE2、SS的含量,通过加强胃黏膜的屏障和修复功能保护胃黏膜;蜂蜜保护急性酒精性胃黏膜途径与EGF无密切关联。4)蜂蜜可以通过提高肝组织和胃组织中ADH和ALDH活性从而降低急性酒精中毒大鼠血清乙醇浓度,通过加快酒精代谢保护胃黏膜。3.采用75%乙醇10ml/kg一次性灌胃大鼠3h尚不能造成明显的肝急性损伤,但蜂蜜对急性酒精中毒大鼠肝脏有潜在的保护作用。