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调控转基因在发育的特定阶段和特定组织中进行表达可以更加精确的研究某一基因产物的功能,同时这种可调控性既可以避免传统不可调控转基因在胚胎发育中早期表达的毒性作用或致死作用而阻碍对表型的分析,又可以避免基因过度表达而造成难于分析的复杂的多表型。四环素调控系统由于可以严密高效的调控转基因的表达,而从众多的调控系统中脱颖而出,被广泛应用于各个生物学领域,并已成功应用于人工调控转基因小鼠中外源基因的表达。
本研究即是应用四环素调控系统中的Tet-on系统,将其反式激活子rtTA用分子生物学方法克隆到仅在前脑特异性表达的钙调蛋白依赖性蛋白激酶α亚基启动子序列之后,构建p279-rtTA重组质粒。通过对FVB小鼠受精胚胎的雄原核显微注射,获得阳性转基因小鼠,以此构建脑区特异性表达rtTA的工具小鼠模型。此小鼠模型建立之后,与本室已构建的pTRE—SV40Tag转基因小鼠,即Tet-on系统中反应组分转基因小鼠杂交,得到双阳性转基因小鼠经强力霉素诱导检测SV40Tag在前脑表达情况,由此来验证该模型工具鼠的诱导效率。
实验中注射移植后出生原代小鼠179只,经PCR和Southern检测得到p279-rtTA阳性小鼠3只(1♂2♀)。F1代阳性小鼠脑组织中检测到rtTA的表达,其它脏器中未检测到。通过饮水添加Dox(2mg/ml)及5%蔗糖进行诱导的杂交双阳性小鼠脑及各脏器组织中未检测到SV40Tag的表达。实验结果显示,此四环素调控组分的转基因工具鼠的构建是成功的,它可以为将来细致研究其他脑瘤相关基因的功能及基因治疗的研究提供便利。