马尾松毛虫质型多角体病毒VP3和VP5的基因定位和初步功能分析

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昆虫质型多角体病毒(Cytoplasmic polyhedrosis virus,CPV)属于呼肠孤病毒科,质型多角体病毒属。马尾松毛虫(Dendrolimus puntatus)质型多角体病毒( DpCPV)是松毛虫的病原物,对松毛虫的控制起着十分重要作用。本实验室首先完成了DpCPV全基因组序列的测定和分析工作。DpCPV基因组由10条分段的dsRNA组成,编码5种结构蛋白,推测其中S4和S7节段分别编码病毒粒子的两个表面结构蛋白--大突起和小突起蛋白。在本研究中作者对DpCPV的两个重要结构蛋白进行了基因定位,并对其功能进行了初步的研究。   本论文分两部分。   第一章系统的介绍了呼肠孤病毒的分类,病毒的入侵、复制和组装机制。对质型多角体病毒的分类与命名、多角体和病毒粒子、病毒感染、基因组的结构和功能作了介绍,并简要介绍了目前无囊膜病毒的宿主吸附蛋白的研究进展。   第二章对DpCPV的结构蛋白VP3和VP5进行了基因定位,研究了这两个蛋白对DpCPV感染性的影响,并利用杆状病毒表达系统表达了全长的VP3蛋白。电泳回收DpCPV基因组的S4和S7片段,RT-PCR扩增其ORF及抗原区,克隆于原核表达载体,在大肠杆菌BL21菌株中进行表达,免疫家兔制备多克隆抗体。Western blot结果显示DpCPV基因组S4和S7片段编码蛋白的抗体分别能够与结构蛋白VP3和VP5杂交。免疫胶体金的方法也证明S4和S7编码的蛋白定位于病毒粒子的外表面。同时,将DpCPV的VP1、VP3和VP5的抗体与病毒混合后,分别感染Sf-9细胞和甜菜夜蛾幼虫,结果表明只有VP3一个抗原区的抗体对DpCPV感染性存在明显的影响。为了进一步研究VP3的生物学功能,利用杆状病毒表达系统成功的表达了DpCPV的VP3全长蛋白。
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