一种新型转染试剂RLW18的制备及性能研究——阳离子型多肽RLW18合成表征及抑制卵巢癌细胞A2780增殖机制研究

来源 :南京工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guobinlei
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
研究背景:现代基因工程的飞速发展带动了一些新型药物的广泛研究,如多肽,蛋白质,氨基酸。这些药物在研究与应用中表现出了出了巨大的治疗潜能。但是,它们的不稳定性和很难穿越生物屏障到达靶目标的特点使这种潜能仅局限于实验室阶段。这些新药类物质并不能通过传统的方式有效的传递。如脂质体,作为一种药物传递载体,在血液传递的过程中被快速的清除,且其负载能力低,化学性质不稳定,这些缺陷使其应用受到限制。因此,寻找到一种安全高效的转染试剂是加快药物研究发展的有效方案。研究目的:通过固相合成法合成一种阳离子型多肽,探讨该多肽分子的结构及其自组装的机理,并通过体外细胞实验探索该多肽作为一种新型转染试剂的可行性。研究方法:固相合成法合成序列为RLWRLLWRLWRRLWRLLR的多肽链,半制备液相色谱进行提纯,然后通过质谱进行多肽链的验证。通过芘荧光探针检测该转染试剂疏水区域的形成,电导率测定临界胶束浓度,CD谱图探测其溶液对多肽折叠的影响,动态光散射用于测定其多肽粒径的大小及分散水平。与外源基因进行结合后,通过电泳测定其包裹能力。然后通过一系列细胞实验验证其转染效率,包括转染卵巢癌细胞观察细胞增长,CCK8法检测细胞毒性,细胞迁移实验检测转染后的细胞迁移水平,流式细胞术检测干扰RNA调控细胞周期的水平,最后通过RT-PCR和Western blot从分子和蛋白水平检测转染效率。研究结果:合成并纯化出纯度为90%以上的多肽,质谱确定其分子量为目的多肽。芘荧光探针检测多肽在水溶液中形成了胶束,电导率测得其临界胶束浓度约为0.9mg/ml。RLW18在水溶液中形成的二级结构含82.3%β-折叠,PBS溶液中离子会干扰RLW18形成二级结构。在水溶液中多肽分布不均匀,200nm左右及以下粒径大小含量为44.95%,大部分粒子发生了聚集。RLW18对与干扰RNA的包裹力约为28∶1-22∶1,转染时可选此比例为最优转染配比。RLW18介导外源基因进入卵巢癌细胞进行转染后,细胞增值速度下降,部分细胞控制在G1期和S期,细胞迁移率下降。CCK8毒性实验结果显示其毒性较小,为一种安全的转染试剂。细胞周期,mRNA表达量和FLIP蛋白表达量数据说明,该转染试剂携带外源基因进行转染的效率约为26.7%。研究结论:RLW18作为一种新型的转染试剂,安全性高,毒副作用小,但其本身的聚集现象导致了自组装的纳米粒子较大,不利于胞吞作用,进而降低了转染效率。
其他文献
高尿酸血症是一种长期嘌呤代谢紊乱、以痛风性关节炎为主要临床表现的代谢性疾病.目前大量研究显示,高尿酸血症对慢性肾脏病发生、发展具有非常重要的影响.其机制可能与尿酸
自发性脑出血具有高发病率、高致残率及高病死率的特点.脑出血后继发性脑损伤对神经功能及预后有严重不良影响,而血肿周围水肿作为继发性脑损伤的一个代表指标,近年来受到越
低血糖是临床常见现象,低血糖发作增加患者的并发症、病死率,延长患者住院时间和增加住院费用.但非糖尿病患者低血糖常常被临床医生忽略.该文就非糖尿病住院患者低血糖的流行
在祖国温暖的怀抱里,成长着这样一批优秀的中华儿女:从小他们在家庭和社会的正义思想教育下长大,革命先辈和时代英雄精神铸就了他们的魂魄,世间的正义良知凝聚成他们对祖国和
微藻能源已成为全球生物能源领域的研究热点,缺氮、缺磷和缺铁等胁迫条件可有效促进微藻细胞内油脂的合成和积累,已成为能源微藻培养过程中调控油脂积累的主要手段。目前文献中对胁迫条件下产油过程生理生化及油脂代谢等方面的认识主要以衣藻等模式藻为主,对可大规模培养的工业藻株在该方面的相关研究少有报道,限制了微藻能源的产业化。笔者所在课题组首创的异养-稀释-光诱导串联培养技术,可在短时间内迅速提高小球藻胞内油脂
异物嵌顿致阴茎绞窄是临床上发生较少但需急诊处理的疾病;不同异物致阴茎不同程度绞窄的急诊救治方法不同.目前,阴茎绞窄的急诊救治方法大致分为4种:线绳缠绕法、穿刺抽吸放
甲壳素是一种天然高分子化合物,蕴含量位居自然界第二位,仅次于纤维素。其脱乙酰产物壳聚糖由于具有广谱抑菌性、生物安全性等特点,可开发成为新型安全高效的食品添加剂以及
煤化工废水是由煤气化废水深度处理工艺段中经膜分离产生的浓盐水,具有盐分高、有机物浓度高、色度大等特点,无法直接排放或生化处理。同时严格的环保政策给膜浓缩液的处理带来
组织部门作为党委教育管理和选拔任用干部的职能部门,怎样才能为党和人民选拔出想干事、能干事、干成事的干部,这就需要我们解放思想、转变观念,采取多种措施,把党的精神贯彻
车前草(Plantago asiatical)为车前科(Plantaginaceae)车前属(Plantago)多年生草本,以其种子和全草入药,为一种常用中药,有利水通淋、清肝明目的功效,可以治疗小便不利,水肿等;全草还