核型Vasohibin-2在人胚胎组织、多器官肿瘤及正常组织中的表达及促增殖功能的初步研究

来源 :南京医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:qiuzy
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背景:Vasohibin (VASH)是近年来发现的一族新基因,该基因家族目前由VASH1及VASH2共同组成。VASH2具有与VASH1具有截然相反的功能:对血管生成起促进作用。最近,VASH2还被发现在多种实体肿瘤中具有促进肿瘤血管生成的作用。因此,VASH家族被认为在胚胎发育及多种实体肿瘤的发生、发展过程中通过调控血管生成起促瘤作用。我们在分析VASH2蛋白细胞内定位时发现:编码355个氨基酸的VASH2蛋白定位于胞浆中,而编码311个氨基酸的VASH2蛋白定位于胞核中;根据VASH2蛋白不同变构体的细胞内差异定位,我们将VASH2分为胞浆型及核型。现有研究主要集中于胞浆型VASH2,而核型VASH2蛋白的相关研究尚无报道。我们首次分析了胞核型VASH2在不同胎龄人胚胎组织、多器官肿瘤及正常组织中的表达及相关功能。目的:1)研究不同胎龄人胚胎组织中胞核VASH2表达与细胞增殖作用的相关性。2)研究人多器官肿瘤及正常组织中胞核VASH2表达及促细胞增殖功能。方法:1)购买26个器官/78点的胚胎组织芯片。免疫组化检测核型VASH2的表达,并分析核型VASH2表达与胚胎组织细胞增殖的相关性。进一步免疫荧光分析VASH2蛋白在人胚肾细胞293T的表达水平和细胞中的表达部位。MTT法检测核型VASH2对293T细胞活性的影响,流式细胞仪检测细胞周期。2)购买547点的人多器官肿瘤及正常组织芯片,免疫组化检测核型VASH2的表达并分析核型VASH2表达与细胞增殖的相关性。进一步免疫组化检测Ki-67与核型VASH2表达水平差异,验证核型VASH2与细胞增殖的相关性。构建核型VASH2过表达/干扰稳转肝脏肿瘤及正常细胞模型。检测稳转肝脏肿瘤及正常细胞BrdU光吸收度;流式细胞仪检测细胞周期并分析过表达/干扰稳转肝脏肿瘤及正常细胞周期的变化;结果:1)购买了临床资料完整的胚胎组织芯片。胞核型VASH2除了在已经发育完善的心脏组织中表达阴性或弱表达,在其他胚胎组织中显著高表达。核型VASH2的表达与胚胎细胞核分裂指数明显正相关。转染核型VASH2可促进293T细胞的生长;转染核型VASH2细胞的G2+S期较空白组及干扰组增加,比较差异有显著性。2)胞核型VASH2除了在已经发育完善的成熟组织中表达阴性或弱表达,在其他处于分裂增殖状态正常及肿瘤组织中显著高表达。Ki-67检测证实核型VASH2的表达与细胞增殖存在相关性。过表达核型VASH2上调肝脏肿瘤及正常细胞中BrdU水平;干扰核型VASH2下调肝脏肿瘤及正常细胞中BrdU水平。转染核型VASH2肝脏肿瘤及正常细胞的G2+S期较空白组及干扰组增加。结论:1)核型VASH2促进人胚胎、正常组织及肿瘤细胞增殖。2)核型VASH2通过促进细胞周期G0/G1向S转化来促进细胞增殖。
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