【摘 要】
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基因工程技术的发展,为开发新型功能性食品提供了新技术及新思路.该文运用基因工程技术获得了一种基因工程抗体——乙肝单链抗体.首先构建了原核非融合表达载体,并对表达条件
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基因工程技术的发展,为开发新型功能性食品提供了新技术及新思路.该文运用基因工程技术获得了一种基因工程抗体——乙肝单链抗体.首先构建了原核非融合表达载体,并对表达条件进行优化,再对目的蛋白采用离子交换层析法进行纯化后复性.选用pET30a载体,一步克隆构建原核非融合表达载体,在BL21(DE3)中以包涵体形式表达单链抗体目的蛋白,其表达最佳条件为1/100的转接量培养至OD<,600>=0.6左右时加入IPTG(终浓度1mM)于37℃诱导4h,表达目的蛋白占总蛋白的40﹪.对包涵体进行超声破碎和酶溶两种方式相结合破碎菌体,再洗涤包涵体.之后通过阳离子柱交换层析对目的蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE检测得到纯化的目的蛋白,对纯化的目的蛋白采用释释法和透析法对比进行复性.透析法的复性率低.稀释法中复性率最高达40﹪.
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