量子点荧光微球用于猪繁殖与呼吸综合征检测新方法研究

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猪繁殖与呼吸综合征( Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)又称蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种急性传染病。该病流行范围广,死亡率高,给我国养猪业带来了巨大的经济损失,成为我国养猪业中危害最大的传染病之一。因此发展和建立一种快速、高灵敏的检测方法对于猪繁殖与呼吸综合征的诊断与控制具有重要的意义。  随着纳米科技的不断发展,基于信号放大的纳米材料的合成以及分析应用成为研究热点。量子点荧光微球作为一种荧光以及电化学信号放大的复合材料在生物成像、疾病检测等方面取得了一些进展,但在动物重大疾病的检测方面研究的较少。本文合成了量子点包裹的二氧化硅微球,并偶联蛋白,采用间接荧光免疫分析法( Fluorescence-linked immunosorbent assay, FLISA)检测猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)血清中的抗体,主要研究内容及结果如下:  1.合成了3种不同粒径的单分散二氧化硅微球并对其表面进行了氨基化修饰;制备了水溶性 CdTe/CdS量子点。分别用静电自主装的方法和共价偶联法合成了量子点包裹的二氧化硅微球。用2种方法合成的量子点包裹的二氧化硅微球都具有高荧光强度,粒径均一、单分散性良好的优点。用共价偶联法合成的荧光微球表面包裹有更多的量子点。  2.建立了一种快速、高灵敏检测猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)血清中抗体的方法。在上一章的基础上,用共价偶联法合成了100 nm左右的量子点包裹的二氧化硅微球,将荧光微球表面偶联链霉亲和素,并连接生物素化的羊抗猪IgG制备成荧光微球探针。采用间接荧光免疫分析法(Fluorescence-linked immunosorbent assay, FLISA)在96孔板中对PRRS高免阳性血清中的抗体进行了检测,检测结果表明:量子点荧光微球探针保持了较高的生物活性,96孔板中的荧光强度与高免阳性血清在1:25-1:800的稀释范围内具有较好的线性相关性,检测限为高免阳性血清稀释1180倍。同时和ELISA方法进行了对比,同ELISA方法相比,本方法步骤更简单,分析时间更短,检测限更低。  3.在上一章的基础上,将荧光微球探针中的量子点用酸溶解后释放 Cd2+,和Rhod-5N染料结合产生强烈的荧光信号,用来检测PRRS血清中的抗体。检测结果为:荧光信号强度与PRRS高免阳性血清在1:40-1:1280的稀释范围间具有很好的线性关系,线性相关系数为0.9956,检测限为高免阳性血清稀释2350倍。相对于量子点荧光微球探针的荧光信号放大,本章使用了双重信号放大的策略进一步降低检测限,提高了检测的灵敏度。
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