人参土传真菌病害的生物防治

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利用枯草芽孢杆菌防治人参土传病害是一种高效、安全的植保新途径,本研究筛选到两株对人参立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)等多种病原菌有较强的抑菌效果并且抑菌谱较广的生防菌株。对其形态学、生理生化和分子生物学鉴定的基础上,对两菌株的发酵培养基、最佳发酵条件、20L罐发酵、抗菌粗提物进行了研究。人参病原菌的分离与鉴定。从人参染病的根部、茎部、叶部组织中分离纯化两株病原菌。经初步鉴定dg1菌株为立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)和c16菌株为尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)。拮抗菌的分离、纯化与鉴定。从人参根际土壤、未栽新土和人参组织中分离纯化出32株对人参立枯丝核菌(R. solani)、人参尖镰孢菌(F. oxysporum)和人参腐皮镰孢菌(F. solani)具有拮抗作用的细菌菌株。通过复筛,拮抗细菌B59和X1菌株对dg1、c16等真菌抑菌率的平均值达到90%以上,表明细菌B59和X1不仅抑菌谱广,而且抑菌作用明显,是两株具有高效抑菌活性的菌株,因此对细菌B59和X1进行菌株鉴定、发酵研究和抗菌物质分析。对B59菌株、X1菌株的形态特征、培养性状、生理生化特征和16Sr DNA分子生物学鉴定,结果显示为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。通过正交试验对B59菌株和X1菌株的培养基成分进行优化,并通过单因素试验对两菌株的最适培养条件进行了研究。B59菌株培养基成分和最适培养条件为:葡萄糖15g/L,牛肉膏5.0 g/L, NaH2PO4+Na2HPO4 5g/L, pH8,250mL三角瓶中装入25mL培养基,接种量为1.5%,30℃,160 r/min培养。X1菌株的最佳培养基成分和培养条件为:葡萄糖15g/L,牛肉膏+酵母膏(1:1) 5.0g/L,NaH2PO4+Na2HPO4 5.0 g/L, pH8,250mL三角瓶中装入25mL培养基,接种量为1%,25℃,160 r/min培养。优化后培养的枯草芽孢杆菌X1和B59菌株对人参腐皮镰刀菌(Fusarium solani)抑菌能力显著提高。利用优化后的培养基和培养条件对B59和X1菌株进行了20L罐发酵,培养24h后,枯草芽孢杆菌B59菌剂的活芽孢数为2.6×109cfu/mL;枯草芽孢杆菌X1菌剂的活芽孢数为2.3×109cfu/mL。B59和X1的发酵液和抗菌粗提物对供试病原菌均有较强的抑制作用,说明B59和X1菌株在代谢过程中分泌了具有拮抗作用的蛋白或多肽类物质。
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