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转基因动物技术逐渐成熟并广泛应用于医药、生产、食品等研究领域,为促进社会发展起到了巨大的作用。我国转基因动物的研究已获得了突破性的进展,科研成果层出不穷,生长快、抗病强和肉质好的转基因猪、牛、羊等动物逐渐问世。但是,转基因动物可能对生态环境产生影响,也可能影响生物的多样性。转基因生物的安全性问题已成为社会关注的焦点,并引起了社会的广泛讨论,而焦点主要集中在生态环境、食品安全等方面。为研究转基因猪是否会对环境产生影响,尤其是外源基因是否漂移到其它生物体基因组中,本试验针对转基因猪安全评价中存在的关键问题,开展转基因猪的环境安全评价技术研究,具体内容包括:普通PCR检测外源基因灵敏度分析,转基因猪与非转基因猪之间、转基因猪与环境微生物之间的基因漂移分析。这些研究内容为评价转基因猪的外源基因漂移到其它生物基因组中的风险提供了技术资料。1) PCR检测外源基因灵敏度为了评价PCR反应检测外源基因的灵敏度,将已经整合外源基因且浓度已知(2.49×109拷贝/μL)的质粒载体进行倍比稀释,通过PCR方法扩增倍比稀释液中的外源基因,结果显示:在10μL的PCR体系中检测质粒中appA基因、CMV-appA基因、MX1基因、CMV-MX1基因所需的质粒最低浓度为:2.4×103拷贝/μL、2.4×104拷贝/μL、2.4×102拷贝/μL、2.4×103拷贝/μL。2)转基因与非转基因猪之间基因漂移为了评价转基因猪与受体母猪之间是否会发生基因漂移,在受体母猪分娩后采集了10头受体母猪的母体胎盘样本,在分娩2月后采集了受体母猪的血液样品。提取了受体母猪的胎盘及血液中的DNA,通过PCR方法检测胎盘和血液DNA,均未检测到外源基因的存在。选择了2月龄4头转基因阳性的母猪,将其与4头日龄相近的普通大白母猪进行同栏饲养,在同栏饲养3月、5月、7月时抽取普通大白猪的血液,提取DNA并检测外源基因,均未检测到外源基因的存在,证实在同栏饲养的7个月时间里转基因猪与普通猪之间没有发生基因漂移。3)猪场中粪便及周围土壤中基因漂移为了评价转基因猪的外源基因漂移到肠道微生物或者环境微生物中的风险,采集了4头转基因阳性猪粪便、4头转基因阴性猪的粪便、4头普通大白猪粪便、8组猪场粪池中的粪便、8组猪场内土壤、12组猪场周围土壤样品。提取了粪便的DNA,并且验证了提取得到的粪便DNA对于PCR反应的抑制能力:以50μL的扩增体系检测倍比稀释的质粒载体溶液中的外源基因,用一定量的粪便DNA来代替扩增体系中的双蒸水,当加入的粪便DNA的量为:0、1μL、2.5μL、5μL、10μL、15μL时,PCR检测外源基因最低检测到:2.49×105拷贝/μL、2.49×106拷贝/μL、2.49×107拷贝/μL、2.49×108拷贝/μL、0。提取了采集的粪便的DNA、猪场内土壤DNA以及猪场周围土壤的DNA,利用PCR的方法检测了外源基因,均未检测到外源基因的存在。