芦丁调控肺动脉和肠系膜动脉舒缩的作用与机制

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目的:观察芦丁对肺动脉和肠系膜动脉舒缩的影响,并探讨其可能机制。   方法1、取大鼠离体肠系膜动脉和肺动脉血管,采用组织浴槽血管环法进行血管紧张性研究,观察累积浓度芦丁对基础状态和苯肾上腺素(PE)预收缩的血管环的作用,探索芦丁对肺循环和体循环作用是否存在差异。   2、通过分离培养牛肺动脉内皮细胞,采用NO荧光探针检测技术,观察芦丁对肺动脉内皮细胞NO生成量的影响;   3、采用Western blot技术,观察从eNOS产物上确定芦丁在活化eNOS和NO释放的机理。   4、采用Western blot技术,通过观察芦丁对eNOS活化有关的效应蛋白的影响,从蛋白质交互作用机理上阐明芦丁增加NO释放的机制和信号转导途径。   5、采用不同的钾离子通道阻断剂,观察不同的钾离子通道对芦丁收缩肠系膜动脉血管环的影响。   6、采用无钙液和L-型钙通道阻断剂硝苯低平,观察细胞外钙和L-型钙通道对芦丁收缩肠系膜动脉血管环的影响。   结果1、芦丁对基础状态内皮完整肺动脉血管无作用。对PE预收缩的内皮完整肺动脉血管环,芦丁呈浓度依赖性舒张作用。此舒张作用可部分被一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME),除去内皮也消除芦丁对肺动脉血管环舒张作用。   2、芦丁使牛肺动脉内皮细胞中NO生成量增加。   3、经芦丁作用后,肺动脉内皮细胞中活性位点eNOS(Ser1177)磷酸化增强和抑制性位点(Thr495位点)的去磷酸化。同时芦丁上调总eNOS蛋白的表达。   5、芦丁对基础状态内皮完整肠系膜动脉血管有收缩作用,同时芦丁可以减弱PE收缩肠系膜动脉。对PE预收缩的内皮完整肠系膜动脉血管环,芦丁呈浓度依赖性舒张作用。此作用可部分被去内皮和L-NAME(10-4mol/L)所减弱。   6、芦丁对肠系膜动脉的收缩作用可部分地被哌唑嗪,新霉素,4-AP和GLYB所阻断。   7、无钙液和硝苯地平对芦丁诱导肠系膜动脉收缩作用无影响。   结论 芦丁对肺动脉具有浓度依赖性的舒张作用,可能机制是促进活性位点eNOS(Sor1177)磷酸化增强和抑制性位点(Thr495位点)的去磷酸化,导致eNOS合酶的表达量增加,促进NO的生成。芦丁并不刺激HSP90与eNOS结合增加eNOS合酶的活性,同时芦丁可能作用于Akt的某个磷酸化位点来激活Akt,而对总的Akt蛋白表达无影响。   芦丁对于肠系膜动脉的调节作用主要是通过非竞争性地结合的α1受体,激活磷脂酶C,通过KATP和Kv通道,促使细胞内钙释放,增高胞内钙离子浓度,导致肠系膜动脉平滑肌收缩。而当用PE预收缩肠系膜动脉后,芦丁对肠系膜动脉的调节作用则表现为舒张作用,机制可能是与α1受体的结合位点被占据转而作用于内皮,通过NO-cGMP途径导致血管舒张。
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