三氧化二砷（As₂O₃）是中药砒霜中的主要有效成分,在体外实验中发现As₂O₃可诱导急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞发生凋亡,临床实验也证实经As₂O₃治疗的APL病人可达到完全缓解。目前As₂O₃已由美国FDA批准用于治疗复发或难治性的APL。近年来有研究表明As₂O₃的促凋亡作用不仅局限于APL细胞,对一些其他类型白血病及实体瘤细胞均有促凋亡作用。肝癌是我国常见和高发的恶性肿瘤,对常用化疗药物均不敏感。与相关研究报告一致,本课题组证实As₂O₃能促进体外生长的肝癌细胞株HepG2发生凋亡,抑制细胞增殖。鉴于As₂O₃的毒性和致癌性,寻找促进其疗效并降低其用量及毒性的辅助药品显得十分重要。有研究报道,维生素C（AA）可增强骨髓瘤细胞对As₂O₃的敏感性。并且本课题组发现一定剂量AA能增加As₂O₃诱导的肝癌细胞凋亡率,本文拟对其作用和机制进行更深入的探讨。第一部分三氧化二砷与维生素C联用对肝癌细胞活性氧及抗氧化物质的影响§1三氧化二砷与维生素C联用对肝癌细胞活性氧的影响用流式细胞仪检测细胞内活性氧探针的荧光强度,观察As₂O₃和AA对HepG2细胞内活性氧（ROS）的影响。2.0μmol/L As₂O₃、100μmol/L AA联合作用24小时后,细胞内ROS含量增高,为正常对照组1.62±0.093倍,较单用2.0μmol/L As₂O₃组ROS含量（为正常对照组1.35±0.085倍）显著升高（P<0.05）。§2三氧化二砷与维生素C联用对肝癌细胞抗氧化物质的影响用化学显色法检测细胞内抗氧化物质超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、谷胱甘肽（GSH）的活性。2.0μmol/L As₂O₃、100μmol/L AA联合作用24小时后,细胞内SOD活性显著降低（P<0.05）,由正常对照组78.73±15.22 u/mg pr降低到42.58±17.37 u/mg pr,但较单用2.0μmol/L As₂O₃组43.85±11.28 u/mg pr无显著性差异（P>0.05）。联用组作用24小时后,HepG2细胞内GPx活性也从正常对照组的5.78±1.59u下降到0.58±0.75u （P<0.01）,但联用组和As₂O₃单用组GPx活性无显著差异（P>0.05）。单用2.0μmol/L As₂O₃组、单用100μmol/L AA组和联用组孵育细胞24小时后,对细胞内GSH活性均有显著影响。分别从正常对照组的135.22±5.30 mg/g pr下降到101.30±5.76 mg/g pr （P<0.01）、76.10±13.48mg/g pr（P<0.05）和81.91±3.12mg/g pr（P<0.01）。且联用组较单用As₂O₃组有显著性差异（P<0.05）。第二部分三氧化二砷与维生素C联用对肝癌细胞线粒体膜电位的影响用罗丹明123标记线粒体,流式细胞仪检测细胞荧光强度,观察As₂O₃和AA对HepG2细胞线粒体膜电位的影响。作用于细胞24小时后,单用As₂O₃组和联用组均显著降低线粒体膜电位（P<0.01）,且联用组膜电位显著低于As₂O₃单用组（P<0.01）。AA单用组对线粒体膜电位无显著性影响（P>0.05）。第三部分三氧化二砷与维生素C联用对肝癌细胞凋亡蛋白的影响Western Blot法检测As₂O₃与AA联用24小时后对HepG2细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的影响。§1三氧化二砷与维生素C联用对Caspase-3蛋白的影响单用As₂O₃组和联用组均显著激活Caspase-3蛋白（P<0.01）,且联用组激活的Caspase-3蛋白量显著高于As₂O₃单用组（P<0.01）。§2三氧化二砷与维生素C联用对细胞Bcl-2/Bax蛋白量比值的影响单用As₂O₃组和联用组均显著降低Bcl-2/Bax蛋白量比值（P<0.01）,但联用组与As₂O₃单用组比较无显著性差异（P>0.05）。第四部分抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸对三氧化二砷和维生素C联合作用的影响§1 NAC对As₂O₃ + AA联用组细胞内活性氧的影响用流式细胞仪检测装载在细胞内活性氧探针的荧光强度,观察NAC作用前后联用组HepG2细胞内ROS含量的变化。10mmol/L NAC使联用组ROS含量降低（P<0.05）。§2 NAC对As₂O₃ + AA联用组细胞凋亡率的影响10mmol/L NAC使联用组细胞凋亡率从16.06 %±0.86%下降到9.48%±0.67%（P<0.05）。结论AA增强As₂O₃的促HepG2细胞凋亡作用与氧化应激有关。AA通过消耗细胞内GSH使As₂O₃作用生成的ROS堆积,ROS作用于细胞线粒体使线粒体膜电位耗散,从而激活凋亡蛋白Caspase-3,导致细胞凋亡。AA增强As₂O₃的促HepG2细胞凋亡作用与细胞内SOD和GPx活性,以及Bcl-2/Bax比例变化无关。