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电压依赖性阴离子通道(voltage-dependent anion channels, VDACs)是结构上高度保守的孔状蛋白，在能量代谢、细胞凋亡、物质运输和信号转导过程中起着重要的作用。本实验室前期已经在水稻中鉴定出8个VDAC基因(大多数的功能尚未报道)，并且利用膜蛋白酵母双杂交技术筛选出了与OsVDAC5相互作用的7个蛋白质(OsV5IP1-7)。 本研究主要内容包括：⑴将7个互作蛋白基因全长cDNA序列克隆到pPR3-N载体上，与pBT3-SUC-OsVDAC5(1-75aa)共同转化酵母NMY51菌株。从SD-2固体培养基中挑取单克隆于YPAD液体培养基中扩大培养，当OD546约为0.6-0.8时，将菌液稀释10倍、10-2倍、10-3倍后取2.5μL在SD-2、SD-4和SD-4(3-AT)固体培养基上培养。结果表明：筛选出的7个OsV5IP同OsVDAC5(1-75aa)蛋白都有相互作用。⑵根据蛋白质序列分析，将OsV5IP1和OsV5IP2氨基酸序列各分为两部分，即OsV5IP1(1-239aa)、OsV5IP1(240-364aa)、OsV5IP2(1-90aa)和OsV5IP2(91-210 aa)，将这四部分片段分别克隆于原核表达载体 pET-32a中进行体外蛋白的表达和 pull-down实验。结果表明：OsV5IP1(1-239aa)同OsVDAC5(1-75aa)蛋白发生了相互作用，其余三个蛋白同OsVDAC5(1-75aa)在体外未检测到相互作用。⑶通过Gateway同源重组技术，将OsVDAC5(1-75aa)、OsV5IP1和OsV5IP2基因的全长cDNA序列重组入表达载体pSPYC(N)E中，转化农杆菌GV1301-90G，注射烟草叶片。激光共聚焦显微镜观察结果表明：OsV5IP1和OsV5IP2与OsVDAC5(1-75aa)有相互作用发生。