曲霉是一类经呼吸道传播的常见条件致病性真菌，其中以烟曲霉最为常见，其感染引起的侵袭性曲霉菌病（IA）在免疫抑制和恶性肿瘤患者中的发病率和死亡率逐年上升，其中侵袭性肺曲霉病若不及时治疗，死亡率极高。但是，由于IA的临床表现多不具有典型性，曲霉培养敏感性很低，病理学检查不易常规开展，循环中真菌抗原检测法的敏感性和特异性还不足满足临床需求，因此，研究开发快速、无创、敏感性强、特异性高的实验室诊断方法具有重要意义。本实验室前期研究发现，IA患者血清中针对曲霉优势抗原的抗体水平升高，检测这些特异性抗体，有助于IA的诊断。其中二肽基肽酶V(DPPV)是优势抗原之一，其特异性抗体对IA诊断的价值，尚需探讨。　　研究目的:　　选择抗原性强的烟曲霉DPPV肽段进行原核表达;建立检测人血清中抗DPPV肽段IgG类抗体的间接ELISA法;评估其在IA中的早期诊断价值。　　研究方法:　　对烟曲霉DPPV全长序列进行生物信息学分析，选取与人和其他生物同源性低、抗原决定簇密集的区域分段表达。分别采用生物合成和PCR扩增技术，获得DPPV19～144、145～446及19～447位氨基酸肽段的编码序列。构建重组表达质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)获得重组菌，IPTG诱导表达获得重组肽段DPPV19-144p、DPPV145-447p及DPPV19-447p;纯化后三个DPPV重组肽段与确诊IA患者血清进行Westernblot分析，筛选抗原性最强的DPPV19-447p肽段作为包被抗原，建立抗DPPV抗体的间接ELISA法;评估该检测方法对侵袭性曲霉病（IA）的诊断价值。　　研究结果:　　(1)烟曲霉DPPV同源性分析显示与人源和其他病原菌蛋白的同源性低，结合结构域和抗原决定簇密集分布区域，我们选择对烟曲霉19～144、145～447和19～447位氨基酸肽段进行克隆表达基因进行克隆。构建了相应的工程表达菌株并诱导表达，获得带有His标签的DPPV19-144p、DPPV145-447p及DPPV19-447p肽段，分子量分别约为15kD、35.4kD和47kD。　　(2)经Western blot鉴定表明烟曲霉DPPV19-144p、DPPV145-447p及DPPV19-447p重组肽段均可与IA患者血清发生特异性反应，其中DPPV19-447p抗原性最强。以重组烟曲霉DPPV19447p肽段抗原作为建立的的ELISA方法批内变异系数（CV)均值为4.1％和8.6％，批间CV的均值分别为7.1％和10.9％，阻断试验阻断率＞90％，显示该方法稳定性和特异性良好。　　(3)以该法检测IA患者组、非IA患者组和健康组血清抗DPPV19-447p抗体检测结果显示，选择cut off值为0.542时，该方法对IA诊断的敏感性66.7％，特异性90.7％。在非中性粒细胞缺乏的IA患者抗DPPV肽段抗体阳性率(75.3％，55/73)高于中性粒细胞缺乏的IA患者(46.88％，15/32)，P＜0.05。　　结论:　　成功筛选表达了抗原性强的烟曲霉二肽基肽酶重组肽段，建立了检测抗DPPV19-447p抗体的ELISA法，证明DPPV19-447p具有作为IA早期诊断标志物的潜力。