目的：　　 临床上长期大剂量应用糖皮质激素(GC)可导致继发性骨质疏松症,防治主要采用治疗原发性骨质疏松症的药物。本实验室开发研制的双参合剂对D-半乳糖导致的类似老年性骨质疏松有效,但是否可用于糖皮质激素性骨质疏松还没有报道。本实验应用醋酸泼尼松建立大鼠骨丢失模型,通过观察大鼠的骨成分、血清骨代谢酶、骨组织形态计量学、骨密度,骨生物力学等指标的影响,评价双参合剂对醋酸泼尼松致大鼠骨质疏松的药效学作用,为该制剂开发为抗骨质疏松新药提供实验依据。　　 方法：　　 1.动物实验:3月龄SPF级雄性SD大鼠40只,随机分成5组,每组8只,对照组(CON)每日给予蒸馏水5ml/kg灌胃;激素组(GC)每日给予醋酸泼尼松混悬液3.5mg/kg灌胃;激素邯可仑膦酸钠(GC+AST)每日给予醋酸泼尼松混悬液3.5mg/kg以及阿仑膦酸钠0.9mg/kg灌胃;激素+低剂量双参合剂组(GC+SSL)每日给予醋酸泼尼松混悬液3.5mg/kg以及29％双参口合剂5ml/kg灌胃;激素+高剂量双参合剂组(GC+SSH)每日给予醋酸泼尼松混悬液3.5mg/kg以及87%双参口合剂5ml/kg灌胃;以上药物分为上下午两次给药,连续12周。实验结束前第14天、第13天和第4天、第3天注射钙黄绿素7mg/kg作骨双荧光标记。实验结束时,心脏取血处死大鼠,收集血液,离心分离血清,测定血清骨代谢酶及血清睾酮含量;分离右侧胫骨:右侧胫骨上段制成不脱钙骨切片、中段骨制成厚片,通过半自动图像分析系统进行形态计量学参数测量;取右侧尺骨盐酸消化后ICP等离子体发射光谱法测骨钙、磷,羟脯氨酸试剂盒检测骨羟脯氨酸含量,取右股骨测量其骨物理指标、骨密度(DEXA法)及骨生物力学参数(股骨三点弯曲实验),以此评价实验大鼠骨成分、骨量、骨质量等变化;另外称取肾脏、脾脏等湿重计算脏器指数等以观察相关脏器大体变化。　　 2.双参合剂的制备及含量测定:取丹参药材3.6kg,人参须药材5kg,粉碎,加水提两次,浓缩成生药量29%双参合剂,用高效液相色谱法,分别检测双参合剂中人参皂苷Re和丹参素的含量。　　 结果：　　 1.糖皮质激素致大鼠骨质疏松症的特点(1)骨形态计量学呈现骨质疏松的表现①胫骨上段松质骨有明显的骨丢失:与正常对照组比较,糖皮质激素大鼠胫骨上段松质骨的骨小梁面积百分率(%Tb.Ar)、骨小梁厚度(Tb.Th)和骨小梁数量(Tb.N)分别降低了24.0%、20.5%和5.9%,骨小梁分离度(Tb.Sp)增加了30.0%,但由于组内标准差大,差异无统计学意义;荧光周长百分数(%L.Pm)增加了8.2%;骨矿化沉积率(MAR)、骨形成率(BFR/BS)分别降低了14.3%、9.7%,破骨细胞数量(Oc.No)和每毫米破骨细胞数(Oc.N/mm)分别显著增加153.6%和227.3%(P＜0.01)。结果提示胫骨上段松质骨骨丢失与骨吸收增强有关。②胫骨中段皮质骨存在骨丢失:与正常对照组比较,糖皮质激素大鼠胫骨中段皮质骨的皮质面积百分数(%Ct.Ar)下降1.8%,骨髓面积百分数(%Ma.Ar)增加6.7%,骨外膜的荧光百分数(%P-L.Pm)、骨矿化沉积率(MAR)和骨形成率(BFR/BS)分别降低42.0%、33.6%和59.5%,骨内膜的荧光百分数(%E-L.Pm)、骨矿化沉积率(MAR)和骨形成率(BFR/BS)分别降低34.0%、34.5%和53.6%。结果提示胫骨中段皮质骨存在骨丢失。　　 (2)骨钙与骨羟脯氨酸明显减少与正常对照比较,糖皮质激素大鼠股骨钙(Ca)、骨磷(P)、羟脯氨酸(Hyp)减少(P＜0.05或P＜0.01)。说明骨丢失涉及有机质与无机质两方面。　　 (3)股骨骨密度明显减少股骨全段及股骨远端1cm BMD均显著降低(P＜0.05或P＜0.01)。　　 (4)股骨骨生物力学性能明显减弱,骨折风险增加股骨的最大载荷、弹性载荷、弯曲能量、刚性系数明显下降(P＜0.05或P＜0.01)(5)其他观察指标特点体重、胸腺、脾脏(P＜0.05)和腓肠肌湿重减轻,肾脏指数增加,血清碱性磷酸酶活力、血清睾酮含量降低(P＜0.05)。　　 2.阿仑膦酸钠对糖皮质激素致大鼠骨质疏松的影响与糖皮质激素组比较,阿仑膦酸钠组尺骨Ca/P增加(P＜0.01);股骨骨密度增加,股骨全段及股骨远端1cm BMD均增加(P＜0.05);阿仑膦酸钠使糖皮质激素大鼠体重增加,血清碱性磷酸酶活力增加(P＜0.05),睾酮含量升高(P＜0.05);在骨形态计量学方面,胫骨上段松质骨破骨细胞数量和每毫米破骨细胞数较激素组显著降低50.7%和66.7%(P＜0.01),基本达对照组水平。　　 3.双参合剂对糖皮质激素大鼠骨质疏松的影响(1)骨形态计量学提示双参合剂可预防糖皮质激素大鼠骨质疏松①胫骨上段松质骨:与糖皮质激素组比较,双参合剂低剂量组的%Tb.Ar、Tb.Th和Tb.N分别增加31.7%、3.3%、32.9%,rb.Sp、Oc.No和Oc.N,/mill分别降低了39.3%、60.0%和75.0%;双参合剂高剂量组%Tb.Ar、Tb.Th和Tb.N分别增加35.7%、13.6%和22.4%,Tb.Sp、Oc.No和Oc.N/mm分别降低了33.6%、58.6%和75.0%:以上各项目恢复甚至超越正常对照组(P＜0.05&P＜0.01)。双参合剂低剂量组%L.Pm降低2.4%、MAR、BFR/BS分别增加31.4%、34.5%,双参合剂高剂量组%L.Pm降低14.9%、MAR.、BFRfBS分别增加20.9%、4.2%。双参合剂可部分预防糖皮质激素大鼠胫骨上段松质骨骨丢失,与其抑制骨吸收,增长骨形成有关。　　 ②胫骨中段皮质骨:与糖皮质激素组比较,双参合剂高、低剂量组%P-L.Pm分别增加73.6%、74.9%(P＜0.05)。双参合剂低剂量对糖皮质激素大鼠胫骨中段皮质骨丢失有较好预防作用。　　 (2)骨钙、骨磷及骨羟脯氨酸增加与糖皮质激素组比较,双参合剂高、低剂量能同时增加股骨Ca、骨P及Hyp含量(P＜0.01)。　　 (3)股骨骨密度增加双参合剂低剂量使股骨全段、股骨远端1cm及股骨近端2cm BMD均明显增加(P＜0.01&P＜0.05)。　　 (4)股骨生物力学性能恢复双参合剂高剂量使股骨最大载荷和弹性载荷、刚性系数等指标均有所恢复(P＜0.01&P＜0.05)。　　 (5)双参合剂增加糖皮质激素大鼠体重,使胸腺、脾脏、肾脏及心脏重恢复(P＜0.01&P＜0.05),血清碱性磷酸酶活力增加(P＜0.01)。　　 4.双参合剂中人参皂苷Re及丹参素含量人参皂苷Re在0.04～0.5gg(r=1),丹参素在0.348～4.351.tg(r=1)范围内含量与峰面积积分值呈良好的线性关系。平均加样回收率分别为105.01%、101.90%。双参合剂中人参皂苷Re平均含量104.26μg/ml,丹参素平均含量378.11μg/ml。　　 结论：　　 1.3月龄的SD大鼠给予糖皮质激素12周后,出现继发性骨质疏松,其中,皮质骨和松质骨骨量均丢失,同时骨钙、骨磷与骨羟脯氨酸成分减少,骨生物力学性能减弱、骨密度减少,出现体重减轻、血清碱性磷酸酶活力下降、血清睾酮含量减少等现象。　　 2.阿仑膦酸钠0.9mg/kg灌胃给药12周可使糖皮质激素大鼠破骨细胞数降低,骨Ca/P升高,骨密度明显恢复,可抑制糖皮质激素大鼠所致的体重减少、血清碱性磷酸酶活力下降和血清睾酮含量减少。　　 3.29%(低剂量)和87%(高剂量)的双参合剂灌胃给药12周后均有效防治糖皮质激素致骨质疏松症,双参合剂可通过抑制骨吸收,增加骨形成,减少骨的丢失,从而增加松质骨、皮质骨的骨量,双参合剂还可改善骨微观结构,增加骨钙、骨磷与骨羟脯氨酸的含量,增加骨密度,修复骨生物力学性能,保持骨质量,从而降低骨折发生的危险性;双参合剂增加糖皮质激素大鼠体重,使胸腺、脾脏、肾脏及心脏重恢复,增加血清碱性磷酸酶活力。但高、低剂量双参合剂效果并不呈量效关系变化。双参合剂比阿仑膦酸钠在防治糖皮质激素性骨质疏松方面效果更显著。　　 4.人参皂苷Re和丹参素在所选用测定条件下能够得到较好地分离,检测灵敏度高,测定专属性强,阴性无干扰,可以作为本品的含量测定控制指标。