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细胞凋亡(Apoptosis)是当前生命科学研究的热门领域,在哺乳动物和线虫的凋亡机制方面已取得较大进展,但对于昆虫细胞凋亡的信号途径仍有许多问题有待探究。细胞凋亡的分子机制在生物进化整个过程中高度保守,昆虫细胞凋亡途径与哺乳动物凋亡途径有许多相似之处,也有不相同的地方。在对昆虫模式生物果蝇和哺乳动物细胞凋亡途径的比较研究中发现的不同,对细胞凋亡的发展提出了新的视角。本文主要克隆鳞翅目斜纹夜蛾(Spodoptera litura) Caspase基因的全长cDNA,以期望能对进一步探索该基因在细胞凋亡中的作用和找到与调控Caspase活性相关的蛋白提供重要线索。本实验从莲纹夜蛾(Spodoptera littoralis)和草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)序列出发,根据其中保守性高的序列设计引物,提取SL-1细胞中的总RNA,并进行逆转录和PCR扩增,首先获得了一条419bp的cDNA片段,并以此序列为基础设计了几组3’-和5’-RACE的基因特异性引物,然后采用SMART RACE技术克隆了Spodoptera litura Casp的3’末端和5’末端,通过序列拼接,得到的cDNA全长片段由1241个核苷酸组成,5’末端有154bp的非翻译区,3’末端有174bp(不包含poly(A)序列)非翻译区。该序列包含一个长891bp的完整ORF(open reading frame)翻译成296个氨基酸。在NCBI数据库中利用Blast进行基因同源性检索,结果发现Spodoptera litura Caspase基因序列与Spodoptera frugiperda和Spodoptera littoralis Caspase基因序列具有很高的同源性,发现其同源率分别为92%和99%。利用DNAStar软件构建蛋白系统进化树。对进化树的分析表明,Spodoptera litura Caspase与Spodoptera littoralis效应caspase同源性完全相同,和家蚕(Bombyx mori) ICE-5同源性最低。Caspase家族在正常情况下,以酶原形式存在,有高度保守的QACXG(X为R、Q或G)五肽序列。根据本实验测得的核酸序列推导而出的氨基酸序列有QACQG的保守序列。Spodoptera litura Caspase基因的成功克隆,为进一步研究Spodoptera litura Caspase基因全结构、基因表达与调控奠定了基础。