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研究背景及目的:卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤,起病隐匿,死亡率高。严重威胁是女性健康。与正常组织相比较,ATF4在肿瘤组织中的表达高,肿瘤微环境(如缺氧/无氧、氧化应激和内质网应激等)信号可以上调其表达。目前发现,ATF4与肿瘤细胞的生长转移,侵袭和耐药等信号通路有关。ATF4能够与VEGF-A、uPA基因的启动子区域相结合,增强其转录活性来上调二者表达;而目前表明VEGF-A和uPA基因在卵巢癌的生长及转移中发挥着十分重要的作用。核糖体蛋白RPL41(Ribosomal protein L41,RPL41),由25个氨基酸组成小分子多肽。目前研究表明rpl41表达的下调与多种肿瘤细胞有关。课题组前期研究表明RPL41能够诱导ATF4磷酸化,转移到蛋白酶体内迅速降解。而RPL41分子量小,可以自由穿过细胞膜,具有成为药物的先天优势。在本次研究中,我们使用小分子胎RPL41诱导ATF4表达下调,探讨RPL41对于卵巢癌细胞的抑制作用及其机制,在为卵巢癌的治疗提供新的靶点。研究方法:1.RPL41对OC细胞系A2780及CAOV3细胞的抑制作用,并观察RPL41引起卵巢癌细胞凋亡的形态学改变以及对OC细胞周期的影响(1)利用CellTiter-Glo?荧光细胞活性检测系统观察RPL41对细胞的作用。(2)采用Hoechst荧光染色法观察A2780及CAOV3细胞凋亡的形态学变化。(3)利用流式细胞仪测定不同浓度RPL41干预后,A2780细胞、CAOV3细胞细胞周期与凋亡情况2.细胞划痕试验和Transwell侵袭小室实验研究RPL41对A2780及CAOV3细胞的迁移及侵袭能力的影响。(1).细胞划痕试验观察RPL41对A2780细胞、CAOV3细胞迁移能力的影响(2)侵袭小室实验观察RPL41对A2780细胞、CAOV3细胞侵袭能力的影响3.研究RPL41抑制细胞生长、侵袭及转移的分子机制。(1).双荧光素酶报告基因检测系统研究卵巢癌细胞中ATF4对VEGF-A和uPA启动子的调控作用。(2).应用Western blot及RT-PCR技术验证RPL41诱导的ATF4降解是否能够下调VEGF-A及uPA基因的表达。结果:Hoechst荧光染色及Annexin-V/Pl双染检测A2780细胞、CAOV3细胞凋亡结果显示:不同浓度RPL41作用24h后,随着RPL41作用浓度的增加,细胞凋亡率增加,细胞形态出现改变,在RPL41浓度大于100μM时,差异有统计学差异(p<0.05)。而作用48h后,细胞凋亡趋势并不明显,无统计学差异。CellTiter-Glo?实验结果表明,细胞活性随着RPL41作用浓度的增加,作用时间的延长而降低。划痕实验及侵袭小室实验研究结果表明RPL41可以有效抑制卵巢癌细胞A2780、CAOV3的迁移和侵袭能力,差异具有统计学意义(p<0.01)。双荧光素酶报告基因测试系统,研究结果显示ATF4对VEGF-A和uPA启动子具有调控作用,而Western blot及RT-PCR结果显示:ATF4,VEGF-A和uPA随着RPL41浓度的增高,表达降低。结论:1.RPL41诱导OC细胞产生形态学变化,抑制其生长,促进细胞凋亡,并且作用于G2-M期。2.RPL41抑制A2780及CAOV3细胞的迁移及侵袭能力3.RPL41诱导ATF4下调,进而对VEGF-A及uPA启动子进行调控4.RPL41可以作为敲低ATF4的媒介