目的:确定上海地区TTMV的流行毒株,并设计特异性引物进行原核表达、纯化,最终建立间接ELISA检测方法,为临床TTMV的诊断提供理论基础。方法:采用巢式PCR技术分别检测TTMV 4个型的阳性率,利用Mega4.0软件和DNASTAR进行进化分析和同源比对,并绘制系统进化树;将TTMV 2型ORF1基因在大肠杆菌中进行原核表达,用Ni-NTA柱对表达产物进行纯化,采用Western blot检测并分析结果,并以此重组蛋白包被ELISA板,通过反应条件的优化,建立检测TTMV血清抗体的间接ELISA方法,并利用该方法检测临床280份血清样品。结果:(1)被检的176份血液样品中,TTMV 2型感染率最高,达到14.2%,进行同源比对并绘制系统进化树,确定TTMV 2型AB038628和AB038626毒株为上海地区的流行毒株。(2)TTMV 2型ORF1基因在大肠杆菌中以包涵体的形式进行了高效表达,表明该重组蛋白具有良好的反应原性,能够很好的识别TTMV抗体。(3)建立的TTMV间接ELISA检测方法,经重复性试验、特异性试验和灵敏性试验结果显示,该方法具有较好的可重复性;与TTV、HIV、人星状病毒和人博卡病毒阳性抗体均无交叉反应。结论:TTMV 2型AB038628和AB038626毒株为上海的流行毒株,且2型ORF1基因的原核表达产物具有良好的反应原性,并将该重组蛋白作为抗原包被ELISA板,建立了检测TTMV的间接ELISA方法,对上海地区和辽宁地区280份血清样品进行了检测,阳性率分别为34.68%和39.74%,可作为诊断TTMV的实验依据。