目的：在牙周病及正畸临床中，牙槽骨组织的改建是牙周愈合、牙齿移动的关键，由成骨和破骨两大效应细胞共同作用完成。目前的研究认为成骨细胞在骨改建机制中处于“中心调控地位”，其分化和功能是骨改建的核心内容。成骨细胞属于结缔组织细胞，在体内无增殖能力，起源于多能的骨髓基质的间质细胞。间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)是目前倍受关注的一类具有多向分化潜能的成体干细胞，其广泛分布于各种不同的组织中。在体外不同的理化环境和细胞因子的诱导下，MSCs具有可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞甚至神经元样细胞等多系分化潜能。现已证实在骨特异性的转录因子核心结合因子(core binding factor a 1，Cbfal)诱导下，MSCs向成骨细胞系分化。在其分化过程中，受到多种因子和激素的调节。MSCs在体内的增殖和凋亡决定局部成骨细胞的补充速度。 Bcl-2和Bax是一对重要的癌基因，它们对体内多种细胞的凋亡有调控作用。Bax基因具有促进细胞凋亡的功能，而Bcl-2则与之相反，两者的作用相互拮抗。Bax和Bcl-2形成了细胞凋亡的正负调控。 组织细胞缺氧是临床多种疾病发生、发展及组织改建等所共有的病理生理基础，它同时也调节细胞的许多基因功能表达。正畸过程中施加的机械力在牙槽骨和牙根之间造成局部缺氧。在牙周病的愈合、骨缺损的修复过程中也存在着低氧的微环境。局部微环境缺氧是启动骨改建的重要因素之一。如何在缺氧的病理状态下维持成骨细胞的分化、增殖及凋亡之间的平衡，是骨组织修复改建的一个重要因素。成骨细胞在体内无增殖能力，MSCs作为成骨细胞的种子细胞是近年的研究热点。 本研究运用蛋白免疫印迹检测缺氧对人骨髓间充质干细胞(human bone mesenchymal stem cells，hBMSCs)凋亡基因Bcl-2、Bax表达的影响，探讨缺氧微环境诱导hBMSCs出现凋亡的发生机制，从而为进一步阐明骨改建机理奠定实验基础。 方法：本研究把hBMSCs按不同氧浓度及不同作用时间分组，采用Western blotting分析，检测不同作用时间的缺氧对hBMSCs抑凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Bax蛋白表达的影响。 1、hBMSCs的缺氧处理及实验分组 按不同氧浓度分为对照组和缺氧组，每组设置6h、12h、24h、48h四个时间点，每点4个复孔。 2、细胞总蛋白的提取 将不同处理组的hBMSCs加入细胞裂解液中冰浴3min，使细胞充分裂解、低温离心，弃沉淀；收集上清液分装转移入新的。Eppendof管中，-70℃贮存备用。 3、细胞总蛋白定量 制备BSA标准溶液、工作液、样本溶液。Smartspecplus设定BCA蛋白定量程序，波长560 nm。计算各样本的蛋白浓度，将定量后的蛋白质样本加入5×SDS凝胶上样缓冲液，置于100℃水浴，煮沸3分钟，-20℃保存待用。 4、蛋白免疫印迹 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳：制备10％分离胶和5％浓缩胶，灌注；按预定顺序及蛋白定量换算加样。转膜，结束后将凝胶进行考马斯亮蓝染色，以检查蛋白质是否转移完全，凝胶保存于Swelling solution中；同时可用丽春红染色膜观察转膜效率。免疫染色。化学发光检测信号表达，显影定影扫描成像。抗体洗脱；重复孵育另外一种一抗。结果图像分析。 5、统计分析 SPSS10.0统计软件对数据进行统计处理，实验结果以Mean±Standard deviation(SD)表示，采用Student’s t-test对各时间点相对应两组Bcl-2、Bax表达作两两比较，P<0.05认为有统计学差异。 结果： 1、缺氧对hBMSCs Bcl-2蛋白表达水平的影响：2％缺氧刺激对hBMSCs Bcl-2蛋白表达有明显的下调作用，各时间段的表达量均有明显下降，且有统计学差别。12h组变化最明显，总体上显示出时间依赖性特点。 2、缺氧对hBMSCs Bax蛋白表达水平的影响：2％缺氧刺激对hBMSCs Bax蛋白表达有明显的上调效应，各时间段的表达量均有明显上升，且有统计学差别。12h组变化最明显，总体上呈现出时间依赖性特点。 结论： 1、缺氧培养对hBMSCs的抑凋亡基因Bcl-2有明显的抑制作用，且有一定的时间依赖趋势。 2、缺氧培养对hBMSCs的促凋亡基因Bax有明显的促进作用，Bax的表达变化趋势与Bcl=-2相反。 3、缺氧刺激促进hBMSCs的凋亡，促使骨改建平衡向破骨方向倾斜。