水稻色胺羟化酶基因分子表征及其突变对植物生长和抗褐飞虱效应的研究

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本实验利用γ射线辐照水稻品种“嘉浙B”种子,从其后代中选育了一个类病斑突变体“嘉浙LM”。为了阐明该突变体性状形成的遗传学和生物学基础,开展了突变基因克隆及其分子特征和功能的研究。主要结果如下:  1、确定了嘉浙B类病斑由CYP71A1基因突变造成。基因定位和敲除研究表明,该类病斑性状与前人报导的Sekiguchi类病斑属同一类突变,由色胺羟化酶基因(CYP71A1)的一个等位缺失突变引起。  2、类病斑突变破坏叶绿体结构、影响光合作用。突变体叶片细胞中叶绿体的结构紊乱,提早降解;病斑处的细胞凋亡可能与细胞内的活性氧含量显著升高有关。  3、CYP71A1基因在根部高度表达,突变影响根系发育,引起蛋白质组变化。利用CYP71A1启动子驱动GUS基因表达明确了该基因表达的组织特异性;5羟色胺含量检测和qPCR分析结果一致,发现根部该基因表达水平高,也是5羟色胺最富集的地方;CYP71A1基因突变会影响根系生长,同时改变蛋白质组学特征,在突变体根部有96个蛋白点的水平较野生型高出1.5倍,有79个点则表现出下调。在突变体中,一些糖酵解和多糖代谢相关的通路上的蛋白丰度发生了变化,同时发现其中的一些蛋白质点位于磷脂酰肌醇信号途径,有可能受到5羟色胺调控。  4、水稻5羟色胺合成受褐飞虱侵害诱导,而合成受阻可提高对褐飞虱的抗性。嘉浙LM对褐飞虱抗性显著高于野生型,包括选择性、产卵数、蜜露、存活率等指标。回补试验发现,5羟色胺是一个吸引褐飞虱的物质。褐飞虱侵害可导致CYP71A1基因表达上调,增强5羟色胺合成。  5、褐飞虱侵害水稻可同时增强水杨酸通路基因的表达,而高水平的SA可抑制CYP71A1的转录,表明褐飞虱诱导CYP71A1基因表达存在一条未知途径,而且与SA支路存在竞争。  本研究揭示了CYP71A1突变对根部生长影响的分子机制,同时发现了该基因突变可提高水稻对褐飞虱的抗性,揭示了以5羟色胺调控为核心的水稻抗褐飞虱的分子机制。
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