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本实验利用γ射线辐照水稻品种“嘉浙B”种子,从其后代中选育了一个类病斑突变体“嘉浙LM”。为了阐明该突变体性状形成的遗传学和生物学基础,开展了突变基因克隆及其分子特征和功能的研究。主要结果如下: 1、确定了嘉浙B类病斑由CYP71A1基因突变造成。基因定位和敲除研究表明,该类病斑性状与前人报导的Sekiguchi类病斑属同一类突变,由色胺羟化酶基因(CYP71A1)的一个等位缺失突变引起。 2、类病斑突变破坏叶绿体结构、影响光合作用。突变体叶片细胞中叶绿体的结构紊乱,提早降解;病斑处的细胞凋亡可能与细胞内的活性氧含量显著升高有关。 3、CYP71A1基因在根部高度表达,突变影响根系发育,引起蛋白质组变化。利用CYP71A1启动子驱动GUS基因表达明确了该基因表达的组织特异性;5羟色胺含量检测和qPCR分析结果一致,发现根部该基因表达水平高,也是5羟色胺最富集的地方;CYP71A1基因突变会影响根系生长,同时改变蛋白质组学特征,在突变体根部有96个蛋白点的水平较野生型高出1.5倍,有79个点则表现出下调。在突变体中,一些糖酵解和多糖代谢相关的通路上的蛋白丰度发生了变化,同时发现其中的一些蛋白质点位于磷脂酰肌醇信号途径,有可能受到5羟色胺调控。 4、水稻5羟色胺合成受褐飞虱侵害诱导,而合成受阻可提高对褐飞虱的抗性。嘉浙LM对褐飞虱抗性显著高于野生型,包括选择性、产卵数、蜜露、存活率等指标。回补试验发现,5羟色胺是一个吸引褐飞虱的物质。褐飞虱侵害可导致CYP71A1基因表达上调,增强5羟色胺合成。 5、褐飞虱侵害水稻可同时增强水杨酸通路基因的表达,而高水平的SA可抑制CYP71A1的转录,表明褐飞虱诱导CYP71A1基因表达存在一条未知途径,而且与SA支路存在竞争。 本研究揭示了CYP71A1突变对根部生长影响的分子机制,同时发现了该基因突变可提高水稻对褐飞虱的抗性,揭示了以5羟色胺调控为核心的水稻抗褐飞虱的分子机制。