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[目的]本研究通过体外构建pEGFP-N1-H.ApoE3神经细胞模型,通过H202模拟氧化应激损伤,利用CCK-8检测细胞存活率、利用Hochest33258及流式细胞仪检测细胞凋亡情况,探究ApoE3对神经细胞抗氧化损伤的修复及其可能的作用机制。继而初步阐明ApoE3在继发性脊髓损伤中所发挥的重要作用。[方法]本研究选取大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)为神经细胞模型,10%DMEM高糖完全培养基培养。实验分成四组:①正常对照组(正常神经细胞培养);②H2O2组(正常神经细胞培养+H2O2损伤):③H202+空质粒组(转染pEGFP-N1+H2O2 损伤);④H202+ApoE3 组(转染 pEGFP-N1-H-ApoE3+H202 损伤)。通过G418筛选稳定表达ApoE3阳性克隆株,运用免疫印迹分析(Western-Blotanalysis)定量测定ApoE3蛋白是否稳定表达。阳性克隆株扩增培养后利用CCK-8细胞增殖-毒性检测试剂盒检测细胞存活率,运用Hochest33258试剂和流式细胞仪检测细胞的凋亡率。[结果]1.通过G418持续筛选2周后阳性克隆株出现,细胞能稳定传代,荧光显微镜下观察细胞绿色荧光分布均匀,Western blot验证ApoE3蛋白表达显著增加。2.扩增培养后的细胞利用CCK-8细胞增殖-毒性检测试剂盒检测发现与正常对照组比较H2O2组、H2O2+空质粒组、H202+ApoE3组细胞存活率降低(P<0.05)。与H202组相比较H2O2+空质粒组细胞存活率无显著差别(P>0.05)。与H202组、H202+空质粒组比较,H2O2+ApoE3组细胞存活率显著升高(P<0.01)。3.Hochest33258荧光染色显示:正常PC12细胞核圆呈淡蓝色,细胞核完整,凋亡细胞的胞核呈强亮白色荧光,细胞核固缩,甚至破碎;其中正常对照组细胞凋亡很少,其他组细胞凋亡明显,但H202+ApoE3组凋亡细胞较H202组和H202+空质粒组明显减少。4.流式细胞仪检测细胞的凋亡率发现:正常对照组比较H2O2组、H202+空质粒组、H202+ApoE3组细胞凋亡率增加(P<0.01),与H202组相比较H2O2+空质粒组细胞凋亡无显著差别(P>0.05),与H202组、H2O2+空质粒组比较,H202+ApoE3组细胞早期凋亡率降低(P<0.05),晚期凋亡率与其它两组无明显差别(P>0.05)。[结论](1)研究发现ApoE3蛋白能够提高氧化应激损伤后PC12细胞的存活率。提示ApoE3蛋白具有一定的抗氧化损伤能力。(2)ApoE3蛋白能有效的降低PC12细胞早期凋亡率,但是对于中晚期细胞凋亡没有明显的保护作用。提示ApoE3蛋白对于神经损伤修复发挥着正向保护作用。