骨肉瘤是人类原发性恶性骨肿瘤中发病率及恶性程度最高的,易发生转移及浸润生长而难以彻底根治,因此,探索一种新的免疫治疗方法以提高骨肉瘤的治愈率,成为骨科研究中的重点和难点。热休克蛋白(Heat Shock Proteins, HSPs)是一组具有重要生理功能,高度保守的蛋白质分子家族。热休克蛋白70是热休克蛋白家族中的一员,具有HSP家族的特征,对细胞的生长、应激、以及在肿瘤的发生、发展中具有重要的作用。树突状细胞(dendritic cell, DC)是体内功能最强的抗原提呈细胞,DC细胞表面存在热休克蛋白高亲和力受体CD91,HSP多肽通过与DC细胞上的受体结合而内化,经MHC I类途径将抗原肽呈递在DC细胞表面,进而激活基于抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocytes, CTL),杀伤肿瘤细胞。基于以上发现:本研究构建了HSP70的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达出HSP70基因,经过纯化得到HSP70蛋白。我们选用脐血为原料来诱导扩增DC,用不同组合的细胞因子诱导脐血单核细胞生成DC,再用肿瘤抗原热休克蛋白多肽复合物负载DC,使其诱导特异性的T细胞杀伤活性,杀伤骨肉瘤细胞。实验结果证实:①成功的在骨肉瘤细胞中表达出HSP70基因并纯化出HSP70蛋白。②人脐血经过GM-CSF、IL-4、TNF-α联合培养后,脐血单核细胞可生成大量的DC,高表达CD1a和HLA-DR。③HSP-70多肽负载的DC能产生明显的特异性杀伤骨肉瘤细胞的作用。这一研究成果为骨肉瘤的免疫治疗提供了理论依据。