论文部分内容阅读
目的：1、确定miR-200c转染肺癌A549细胞最佳转染浓度。2、观察上调miR-200c后，紫杉醇及吉非替尼对人肺癌A549细胞增殖及凋亡的变化。3、探讨miR-200c上调后，紫杉醇联合吉非替尼是否具有协同作用。方法：1、转染实验及PCR检测：实验分为转染miR-200c mimics组为实验组，转染miR-200c NC为阴性对照组，肺癌A549细胞为空白对照组；同时设置三个转染浓度20nm、50nm及100nm。通过脂质体lipo2000转染72小时后，SYBR GreenReal-time PCR检测各浓度转染后miR-200c表达变化及其下游ZEB1的表达变化，确定最佳转染浓度。2、细胞增殖实验：采用最佳浓度转染细胞，将转染组及阴性对照组各分成三组：紫杉醇单药组（0-16nmol/L）、吉非替尼单药组（0-40umol/L）、两药联合组。通过MTT法测定miR-200c转染对各组细胞的增殖变化并计算各组的半数抑制率（IC50）。3、细胞凋亡实验：将转染组及阴性对照组各分成四组，分别加入紫杉醇IC50、吉非替尼IC50、两药联合(紫杉醇IC50+吉非替尼IC50）及不加药物.。72小时后采用流式细胞仪检测miR-200c转染对细胞凋亡影响。结果：1、miR-200c转染后，20nm组miR-200c表达量上调1365.29倍；50nm组miR-200c表达量上调16440.88倍；100nm组miR-200c表达量上调4352.11倍，分别与转染组与阴性对照组和空白对照组相比，P值均<0.01。20nm组ZEB1表达量下调24%；50nm组ZEB1表达量下调51%；100nm组ZEB1表达量下调34%，分别与转染组与阴性对照组和空白对照组相比，P值均<0.05。因此，50nm为最佳转染浓度。2、转染miR-200c NC组与转染miR-200c mimics组对比，紫杉醇单药的IC50为8.40vs6.09nmol/L， P<0.05；吉非替尼单药的IC50为20.76vs15.39umol/L，P<0.05；紫杉醇和吉非替尼合用IC50为6.71vs5.83nmol/L（以紫杉醇为参照）或16.69vs14.59umol/L（以吉非替尼为参照）, P>0.05。3、转染miR-200c NC组与转染miR-200c mimics组对比，紫杉醇单药组的总凋亡率16.61±2.51vs26.66±1.78，P<0.05，吉非替尼单药总凋亡率11.56±0.85vs15.82±1.95， P<0.05；紫杉醇和吉非替尼联合的总凋亡率30.05±0.97vs32.87±1.75，P>0.05。结论：1、通过检测转染后肺癌A549细胞中的miR-200c及ZEB1的表达量确定50nm为miR-200c的最佳转染浓度。2、miR-200c可提高紫杉醇及吉非替尼单药对肺癌A549细胞增殖抑制作用，促进肿瘤细胞凋亡作用。3、miR-200c上调后，紫杉醇与吉非替尼联合使用对肺癌A549细胞增殖抑制及细胞凋亡作用无协同作用。