鸡树条荚蒾果中降血糖成分的提取及其活性研究

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:rockman27
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本课题以野生的鸡树条荚蒾果为研究对象,优化高速剪切-超声联合法提取其降糖活性成分;探讨不同的加工条件对降糖稳定性的影响;通过细胞试验验证其缓解HepG2细胞胰岛素抵抗和保护氧化应激L02细胞的降糖活性。主要研究结果如下:为高效制备鸡树条荚蒾果实中的降糖成分,以α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶抑制率为考察指标,优化了高速剪切-超声联合法提取其降糖成分的工艺:高速剪切乳化机转速18000 r/min,料液比1:19 g/mL,提取温度60℃,超声时间40min,剪切时间120 s,超声功率270 W,在此工艺下提取物的α-葡萄糖苷酶抑制率为(72.11±0.86)%,α-淀粉酶抑制率为(56.57±1.05)%;IC50 值分别为 0.844 mg/mL,1.422 mg/mL。采用 Pearson 分析,得提取物中多酚含量与酶抑制率的相关性较高。HPLC分析多酚成分主要有:没食子酸、儿茶素、咖啡酸、杨梅素-3-O-半乳糖苷、绿原酸,其中以儿茶素的含量最高为186.6 mg/g,占总量的 41.94%。考察鸡树条荚蒾果多酚(PVSK)在不同加工条件下的稳定性,PVSK在30~90℃,具有良好的热稳定性;长时间贮藏对PVSK的降糖稳定性影响显著(p<0.05),低温可有效保存其活性。光敏感性较强,其中紫外光照的影响最为显著(p<0.05)。PVSK在偏酸性条件下稳定性较高。高浓度的氧化剂对酶抑制率有显著的降低作用(p<0.05),还原剂对α-葡萄糖苷酶抑制率呈现双重影响效果。Zn+对酶抑制率呈现剂效正相关;Ca+呈现低浓度促进、高浓度抑制;Na+影响不显著;K+会显著降低α-葡萄糖苷酶抑制率。采用高浓度的胰岛素建立HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)模型,探讨PVSK缓解胰岛素抵抗的效果。与模型组对比,0.10~1.00 mg/mL PVSK组的葡萄糖消耗量显著增高;1.00mg/mL的PVSK可显著提高糖原的含量33.65%(p<0.01);己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)活性可分别提高43.36%(p<0.05)、48.41%(p<0.01);对磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、葡萄糖六磷酸酶(G6PC)活性抑制率分别为22.86%(p<0.01)、17.33%(p<0.05)。PVSK可在一定程度上提高IR-HepG2细胞中HK、PK活性,促进糖酵解,抑制G6PC、PEPCK活性,增加糖原含量;从而减少细胞内过多葡萄糖的产生;缓解胰岛素抵抗。采用H2O2建立LO2细胞氧化应激模型。相比于模型组,浓度10~300 μg/mL的PVSK干预12 h,可有效提高细胞存活率;显著降低ROS水平(P<0.05),且呈现剂量效应。测定抗氧化防御体系指标,显示中、高浓度(50、300 μg/mL)组,可显著降低氧化产物丙二醛(MDA)的含量(p<0.05);改善乳酸脱氢酶(LDH)的释放量(p<0.05),调节谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性。流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,得PVSK可减缓H2O2氧化应激造成的LO2细胞G2/M周期阻滞,抑制细胞凋亡。说明PVSK对肝细胞损伤有一定的保护效果,并缓解细胞糖代谢紊乱。
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