仙台病毒（Sendai Virus，SeV）属于副粘病毒科呼吸道病毒属，基因组为不分节段的单负链RNA，编码NP，P，M，F，HN，L等11个蛋白。应用仙台病毒改造的F基因缺失型仙台病毒载体（Sendai virus Vector，SeV）是新兴的RNA病毒载体，由于其宿主范围广、表达量高、胞质表达、安全性好等诸多优点，目前广泛用于基因治疗药物和疫苗研究。　　本课题上篇为针对一种仙台病毒基因治疗产品（携带hFGF2外源基因的F基因缺失型仙台病毒，SeV-hFGF2/dF）及其包装细胞库（导入F基因的恒河猴肾细胞，LLC-MK2/F）的质量控制研究。其中产品质量控制研究主要包括结构确认、纯度、病毒滴度、体外表达和生物学活性以及特殊残留物质检测，在该部分的研究过程中，建立了两个易于标准化和精确度较高的方法，其中一项为“应用流式细胞术检测病毒载体类基因治疗药物感染滴度”，该方法通过建立适合病毒感染细胞特点的数学模型和相应操作流程，并确定了方法质控指标，结果证实该数学模型适合病毒感染细胞的特点，所得结果重现性良好。另一项方法学研究为“应用Pico-Green荧光法检测DNA残留”，通过加标回收率对结果进行校正，证实该方法较传统的斑点杂交法定量准确，且操作简便，灵敏度高。　　细胞库的质量控制研究主要包括细胞鉴别，内外源病毒因子检测，逆转录酶检测等。其中细胞鉴别实验药典三部无明确方法细则，本部分方法学研究通过DNA指纹图谱、同工酶检测和细胞表面F蛋白检测，从遗传，生化酶学以及重组细胞目的蛋白三方面对细胞进行有效鉴别。　　课题的下篇为仙台病毒载体介导Ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-2）靶基因的免疫学效果研究，首先选取HSV-2的糖蛋白D（gD）和核蛋白ICP27由课题合作方日本DNAVEC公司构建了分别表达gD和ICP27的重组仙台病毒活载体（SeV-gD/dF，SeV-ICP27/dF）和串联表达上述两种蛋白的重组仙台病毒活载体（SeV-gD+ICP27/dF），同时应用腺病毒载体自行构建了表达gD的重组腺病毒活载体（Ad5-gD）以比较不同类别的载体对免疫学效果的影响。将四种重组活载体分别按高、中、低三个剂量组免疫Balb/c小鼠，同时设仙台病毒空载体、腺病毒空载体和PBS对照，按0，14天免疫方案免疫，于第21天采血分离血清，取脾。进行免疫效果评价包括体液免疫和细胞免疫，首先用流式细胞仪检测每只小鼠淋巴细胞分型，包括B细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞的百分比，以总体评价重组活载体免疫后淋巴细胞分型的变化。　　体液免疫评价采用噬斑抑制实验，结果证实SeV-gD/dF和Ad5-gD均有较高抗体中和效价且呈现量效关系，SeV-gD+ICP27/dF的抗体中和效价较低，这是由仙台病毒载体表达特点决定的，即外源基因越大，表达量越低。SeV-ICP27/dF各剂量组均无中和活性，因ICP27是核抗原，在病毒内部，无表面中和位点。　　细胞免疫的评价采用CTL实验和分泌IFN-γ的ELISPOT实验，其中CTL实验采用了Calcein-AM荧光法以及CFSE与PI双标记的流式细胞仪测定法。结果证实 SeV-ICP27/dF免疫组能激发较强细胞免疫效应，且呈现量效关系。而SeV-gD+ICP27/dF免疫组细胞免疫效应较 SeV-ICP27/dF弱，考虑其中和效价较SeV-gD/dF低，因此这一串连表达策略被淘汰，可考虑SeV-gD/dF与SeV-ICP27/dF不同比例混合的多价疫苗策略。　　在后一次扩大动物量的免疫中，增加了SeV-gD/dF与SeV-ICP27/dF的1:1混合免疫组，同样设高、中、低三个剂量组。结果证实免疫效果仍弱于SeV-gD/dF与SeV-ICP27/dF的单独免疫组，应优化免疫程序。