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干扰素(Interferon,IFN)是由机体细胞产生的一类具有抗肿瘤、抗病毒、调节免疫功能等多种生物活性的糖蛋白,是机体防御系统的重要组成部分。在众多干扰素类型中,a干扰素具有广谱的抗病毒活性和良好的免疫调节作用,能够增强机体的免疫力。为了开展延边饲养鹅a干扰素基因及其重组载体疫苗的研究,本试验应用植物血凝素(PHA)刺激延边饲养鹅外周血单核细胞,提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增编码鹅α干扰素的基因,将目的基因经TA克隆后进行序列测定分析,将测序正确的经双酶切,构建重组原核表达质粒pET-30a-IFN-α,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达,对表达融合蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定,将蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗延边饲养鹅a干扰素成熟蛋白多克隆抗体,通过琼脂糖扩散试验经行效价检测。结果表明,扩增的鹅α干扰素基因全长576bp,编码192个氨基酸；成功构建了重组原核表达载体pET-30a-IFN-a,表达的重组蛋白经SDS-PAGE和Western-blot检测,分子质量大小约为29ku,并具有良好的反应原性;成功制备鼠抗鹅a干扰素成熟蛋白多克隆抗体,琼脂糖扩散试验检测效价为1：32。为了研究表达延边饲养鹅α干扰素基因重组活载体疫苗的抗病毒活性,本试验通过RT-PCR技术扩增得到延边饲养鹅α干扰素基因,利用基因重组技术构建了pSY681-LP2EP2-IFN-α-Lac转移载体,采用脂质体转染方法将该重组质粒与禽痘病毒FPV-017共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行蓝白斑筛选,收获纯化的重组病毒,并进行重组病毒α干扰素基因的PCR鉴定及重组病毒的间接免疫荧光(IFA)和Western blot检测,通过细胞病变分析干扰素的抗病毒活性。结果显示,成功制备了重组禽痘病毒rFPV-IFN-α,PCR结果显示成功将延边饲养鹅a干扰素基因亚克隆到禽痘病毒载体,间接免疫荧光和Western blot检测表明延边饲养鹅α干扰素基因在CEF中成功获得表达,且具有良好的反应原性;表达产物α干扰素对鹅细小病毒(GPV)在鹅胚成纤维细胞中的复制具有抑制作用。本研究为进一步开展延边饲养鹅α干扰素基因重组活载体疫苗的体内试验和鹅α干扰素免疫调节作用奠定了基础。