B淋巴细胞激活因子表达水平与系统性红斑狼疮关系研究

来源 :南通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:laotzu123
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[目的]建立实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)检测人B淋巴细胞激活因子(BLyS)mRNA含量的方法。从mRNA和蛋白水平,调查系统性红斑狼疮(SLE)患者BLyS表达水平。初步探讨BLyS在SLE的诊断、病情活动等方面的价值。 [方法]在BLyS基因的高度保守区设计特异性的引物和荧光探针,RT-PCR扩增目的片段,通过T-A克隆法构建BLyS定量标准品;采用RFQ-PCR法实时检测样品中相应基因产物的荧光强度,根据标准品建立的标准曲线,由软件自动计算出待测样本中BLySmRNA准确含量,并以BLySmRNA和内参p2MmRNA含量的比值作为评价BLyS表达水平的指标。以新建RFQ-PCR法检测定SLE患者外周血单个核细胞中BLySmRNA含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清BlyS蛋白水平。采用速率散射比浊法测定血清IgG水平。46研究对象分为SLE患者组和健康对照组,患者组又分为活动期组和缓解期组。 [结果]RFQ-PCR法检测BLySmRNA含量的线性范围为109pp./mi~101pg/ml,批内和批间变异系数(cv)分别为2.40%~7.36%和4.26%~12.26%。SLE患者BLySmRNA表达水平显著高于健康对照组(138+0.35/0.83+0.12,p<0.01)。SLE患者BlyS蛋白水平高于健康对照组,且活动期高于缓解期(P<0.05),抗dsDNA抗体滴度升高组高于抗dsDNA抗体滴度正常组(P
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