不同培养体系对牛卵母细胞体外成熟及克隆胚发育率的影响

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本研究中,试验一:探讨了不同的因素对牛卵母细胞体外成熟的影响,目的是筛选出一套适合本实验室条件下细胞核移植的卵母细胞体外培养成熟体系;试验二:探讨了不同的培养条件对牛核移植重构胚体外发育的影响,目的是优化牛核移植重构胚的体外培养体系,进一步提高牛核移植重构胚的体外发育率和胚胎的质量。   结果如下:   1、试验一:探讨了卵泡直径(2-4mm、4-6mm、6-8mm、>8mm)、成熟培养时间、卵巢性周期以及卵丘细胞对牛卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:2mm≤D≤8mm的卵泡中的卵母细胞成熟率明显高于8mm<D卵泡中的卵母细胞的成熟率(P<0.05)。将随机分成三组的卵母细胞分别培养18h(Ⅰ组)、22h(Ⅱ组)和24h(Ⅲ组),Ⅰ组成熟率(68.2%)显著低于Ⅱ组(78%)和Ⅲ组(81.8%)(P<0.05)。采集卵泡期卵巢中的卵母细胞进行体外成熟培养,卵母细胞的体外成熟率(81.7%)要明显高于黄体期卵巢中卵母细胞的体外成熟率(70.6%)(P<0.05)。卵丘—卵母细胞复合体(COCs)的质量影响卵母细胞的体外成熟,A、B、C三级卵母细胞成熟率分别是87.3%、76.2%、29.2%,AB之间差异显著(P<0.05),均与C差异极显著(P<0.01)。   2、试验二:探讨了不同的培养条件对牛核移植重构胚体外发育的影响。分为4个小试验。试验Ⅰ:探讨谷光甘肽对牛核移植重构胚体外发育能力的影响,试验组A中添加1mM谷胱甘肽,核移植重构胚在体外培养7d,核移植重构胚的桑葚胚率(17.0%)、囊胚率(8.5%)明显的提高与对照组(1.3%、1.3%)差异显著(p<0.05);试验Ⅱ:探讨低氧气浓度(5%)对牛核移植重构胚体外发育能力的影响,核移植重构胚在体外培养7d,试验组A0-3d核移植重构胚采用低氧气浓度(5%)条件培养,桑葚胚率(11.8%)、囊胚率(7.8%)明显的提高与对照组(1.3%、1.3%)差异显著(p<0.05);试验Ⅲ:探讨不同的供体细胞对牛核移植重构胚体外发育的影响,核移植重构胚在体外培养6d,两个试验组(A和B)的桑葚胚率都超过50%,早期囊胚率都超过20%,桑葚胚率和早期囊胚率都明显提高并且两个试验组之间差异不明显(p>0.05);试验Ⅳ:初步探讨不同供体细胞对牛核移植重构胚移植后妊娠率的影响,试验组B(牛骨髓间充质干细胞)妊娠牛头数(妊娠80d)多于试验组A(牛胎儿肌细胞),具体的原因还将进一步研究。
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