美洲大蠊提取物Ento-A对慢性复发型溃疡性结肠炎的治疗作用及机制研究

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目的:通过葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium,DSS)诱发慢性复发型UC动物模型,利用流式细胞术,Westen Blot以及HE染色方法,研究美洲大蠊提取物Ento-A对慢性复发性UC的治疗效果及其作用机制。方法:1.建立DSS诱导BALB/c小鼠慢性复发型UC模型,于第28、42、56 d分别处死一定数量的小鼠进行CMDI和HS评分;评价不同浓度DSS对造模小鼠炎症程度的影响,ELASA法测定小鼠血清中IL-1β和结肠组织中IL-6的含量。2.以奥沙拉秦钠胶囊为阳性对照,不同剂量的Ento-A为受试药,复发型UC小鼠连续灌胃给予对应药物15 d,正常对照组和模型对照组分别给予NS溶液。末次给药后次日处死小鼠,计算其脏器指数,测量结肠长度、观察并记录小鼠结肠CMDI和HS评分,MSD法测定血清中促炎细胞因子的表达,采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏和肠系膜淋巴结中淋巴细胞细胞因子的表达量;采用Westen Blot检测结肠黏膜中相关蛋白的含量。结果:1.慢性复发型UC小鼠的DAI、CMDI、HS评分及血清中IL-1β和结肠组织中IL-6含量显著升高(P<0.01)。2.Ento-A治疗DSS诱导慢性复发型UC小鼠实验结果显示:与模型对照组比较,Ento-A各剂量组及奥沙拉秦组均可不同程度降低小鼠DAI、CMDI、HS评分和结肠指数(P<0.05或P<0.01);Ento-A能降低血清中的促炎细胞因子的含量,与奥沙拉秦组无显著差异。3.流式细胞术结果显示,Ento-A能有效升高脾脏淋巴细胞IL-4和Foxp3+的含量,降低IFN-γ和IL-17的含量(P<0.05或P<0.01);降低肠系膜淋巴结IL-4和Foxp3+的含量以及升高IFN-γ和IL-17(P<0.05或P<0.01)。4.WB结果显示,Ento-A能有效降低P-PI3K、P-AKT和P-NF-κB的表达量(P<0.05或P<0.01)。结论:1.DSS诱导慢性复发型UC模型,最佳造模时间为49 d,DSS浓度为2.2%。2.美洲大蠊提取物Ento-A对DSS诱导的小鼠慢性复发型UC有一定治疗效果,其可能与下调复发型UC小鼠血清中促炎细胞因子表达有关。3.美洲大蠊提取物Ento-A可下调节肠系膜淋巴结中淋巴细胞IL-4、Foxp3+的表达,上调INF-γ、IL-17的表达,促进Th1/Th2以及Th17/Treg淋巴细胞的平衡。4.美洲大蠊提取物Ento-A能调节PI3K/AKT通路,通过抑制P-PI3K、P-AKT、P-NF-κB的活化而起到治疗DSS诱导的小鼠慢性复发型UC的作用。
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