【摘 要】
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目的:本研究采用高中低浓度尿酸(Uric Acid,UA)培养人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelial cells,HCAEC),探讨不同浓度的尿酸能否诱导内皮细胞损伤及其机制。方法:(1)为探讨不同浓度尿酸对HCAEC的影响,取对数生长期HCAEC,分为正常对照组、PBS组、2.5mg/dl UA组、5mg/dl UA组、10mg/dl UA组、20
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目的:本研究采用高中低浓度尿酸(Uric Acid,UA)培养人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelial cells,HCAEC),探讨不同浓度的尿酸能否诱导内皮细胞损伤及其机制。方法:(1)为探讨不同浓度尿酸对HCAEC的影响,取对数生长期HCAEC,分为正常对照组、PBS组、2.5mg/dl UA组、5mg/dl UA组、10mg/dl UA组、20mg/dl UA组。(1)MTT法检测细胞存活率;(2)应用RT-PCR检测细胞间黏附分子ICAM-1的m RNA表达水平;(3)使用Western blot法对ICAM1蛋白表达水平进行检测;(4)采用ELISA法对各组炎症因子IL-1、hs-CRP的蛋白表达水平进行检测;(5)荧光探针DCFH-DA检测活性氧ROS表达。(2)为探讨高尿酸诱导内皮细胞损伤的机制,(1)取对数生长期HCAEC,分为正常对照组、20mg/dl UA组、PDTC+20mg/dl UA组,检测ICAM-1 m RNA表达水平及蛋白表达水平,IL-1、hs-CRP蛋白表达水平。(2)取对数生长期HCAEC,分为正常对照组、20mg/dl UA组、NAC+20mg/dl UA组,荧光探针DCFH-DA检测活性氧表达。结果:(1)随着UA浓度的不断增加,细胞存活率逐渐升高;高浓度尿酸能够诱导炎性因子hs-CRP、IL-1β的蛋白表达升高、细胞间黏附分子ICAM-1的转录水平及蛋白表达升高(P<0.05),低浓度和中浓度尿酸不能诱导ICAM-1的转录水平及蛋白表达水平升高,其相关炎性因子hs-CRP、IL-1β的蛋白表达亦不能升高;高浓度尿酸能够诱导活性氧ROS表达升高(P<0.05),低浓度和中浓度尿酸不能诱导活性氧ROS表达升高。(2)NF-κB阻滞剂PDTC能抑制由高尿酸引起的炎症因子的升高(P<0.05);抗氧化剂NAC能抑制由高尿酸引起的活性氧升高(P<0.05)。结论:高尿酸能通过诱导炎症因子及活性氧表达升高引起HCAEC损伤。抑制NF-κB通路的激活能产生抗炎作用,抗氧化剂能抑制由高尿酸引起的氧化应激反应。
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