背景与目的人肝脏胶凝素1(collectin liver 1, CL-L1)基因首先由Ohtani等克隆和鉴定出的一个胶凝素家族的新成员。推测该序列具有典型的胶凝素特点,由N端富含半胱氨酸区、胶原样区、颈区和糖识别区(carbohydrate recognition domain,CRD)构成。已发现的胶凝素多数为分泌蛋白,是固有免疫的重要分子,它们通过凝集病原微生物、激活补体、调理作用、激活吞噬作用和抑制病原生长等参与机体的免疫防御反应。但对CL-L1在人体组织分布和细胞内定位及其功能了解较少。为此,本研究制备人重组CL-L1的多克隆抗体,尝试利用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞真核表达系统表达重组人CL-L1,并检测该蛋白在细胞内的定位。为进一步研究CL-L1在人体组织表达谱及其结构和功能奠定基础。方法将人CL-L1颈区-糖识别区目的基因片段定向插入pRSET-C中,构建原核表达载体,在E.coli BL21中进行原核表达,镍亲和层析柱纯化融合蛋白,免疫家兔,制备多克隆抗体。采用ELISA法检测多抗的效价和抗体的特异性。用构建好的真核表达载体pEGFP-CLL1(含人全长CL-L1 cDNA序列)转染CHO-K1细胞,使用免疫荧光标记技术和Western blot,检测EGFP-CLL1融合蛋白在细胞内的表达部位。结果成功构建了人CL-L1颈区-糖识别区原核表达载体pRSET-C/NECK-CRD△K,在E. coli BL21中表达,镍亲和层析柱纯化,得到相对分子质量19200的融合蛋白,免疫家兔后收获抗血清,ELISA显示抗体效价为1/20000,具有高度特异性；通过免疫荧光标记技术和Western blot分析发现,EGFP-CLL1融合蛋白主要存在于细胞质基质中,不存在于细胞培养上清液、内质网、高尔基体和细胞核等部位。结论本研究成功制备了人CL-L1颈区-糖识别区特异性高的多克隆抗体；CL-L1为已发现惟一存在于细胞质基质中的胶凝素成员。