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目的前期研究证明,长期应用大黄水提取物对大鼠子宫和卵巢的功能有明显的损害作用,为进一步筛选大黄产生生殖毒性的萃取物。本研究比较大黄水提取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物及水溶物对大鼠子宫和卵巢指数,孕酮（P）、睾酮（T）、雌二醇（E2）、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、子宫和卵巢超微结构的影响,确定大黄对子宫卵巢功能及结构影响的主要萃取物,为进一步探讨大黄对生殖系统产生毒性的部位和成分奠定基础。方法按氯仿、乙酸乙酯、正丁醇顺序对大黄水提取物进行萃取,得到相应的萃取物和水溶物。SD雌性大鼠60只随机正常对照组（NC）、大黄水提取物组（4g/kg）、氯仿萃取物组（4.44mg/kg）、乙酸乙酯萃取物组（40.96mg/kg）、正丁醇萃取物组（79.43mg/kg）、水溶物组（835.72mg/kg）,各组用药剂量均相当于大黄生药4.0 g/kg,连续灌胃给药60天。末次给药后24h取血清、子宫、卵巢,计算子宫、卵巢指数;ELISA法检测大鼠血清中P、T、E2激素水平;免疫组化法测定子宫、卵巢中ER、PR蛋白表达水平;HE染色,光镜下观察子宫腺体、卵巢中各级卵泡的结构变化;透射电镜下观察子宫、卵巢超微结构变化。结果1对子宫、卵巢指数的影响:大黄水提取物组、乙酸乙酯萃取物组大鼠卵巢指数与NC组比较分别降低了7.5%、6%,子宫指数与NC组比较分别升高了18.3%、6%。正丁醇萃取物组、水溶物组大鼠卵巢指数与NC组比较分别降低了19.7%、23.4%,子宫指数与NC组比较分别降低了0.02%、4.4%,但差异均无统计学意义（P>0.05）;氯仿萃取物组大鼠卵巢指数与NC组比较升高4.6%,但差异无统计学意义（P>0.05）,子宫指数与NC组比较升高44.5%,差异有统计学意义（P<0.05）。2对血清中P、T、E2水平的影响:大黄水提取物组、乙酸乙酯萃取物组、正丁醇萃取物组、水溶物组大鼠血清中P水平与NC组比较分别降低了2.34%、9.54%、9.25%、6.08%,但差异均无统计学意义（P>0.05）;大鼠血清中T水平与NC组比较分别降低了4.91%、4.24%、6.74%、4.25%,但差异均无统计学意义（P>0.05）;氯仿萃取物组大鼠血清中P水平与NC组比较降低19.49%,T水平与NC组比较降低18.90%,差异均有统计学意义（P<0.05）;大黄水提取物组、正丁醇萃取物组、乙酸乙酯萃取物组、氯仿萃取物组大鼠血清中E2水平均与NC组比较分别升高了53.58%、59.28%、60.23%、87.78%,差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;水溶物组血清中E2水平与NC组比较升高12.93%,但差异无统计学意义（P>0.05）。3对子宫（内膜和腺体）、卵巢（颗粒细胞）中ER、PR水平的影响:氯仿萃取物组、乙酸乙酯萃取物组、正丁醇萃取物组大鼠子宫中ER表达水平与NC组比较分别升高了323.01%、117.77%、82.79%,差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;大黄水提取物组和水溶物组大鼠子宫中ER表达水平与NC比较分别升高了44.07%、27.58%,差异均无统计学意义（P>0.05）。水溶物组、大黄水提取物组大鼠子宫中PR表达水平与NC组比较分别升高了43.75%、19.15%,但差异均无统计学意义（P>0.05）;氯仿萃取物组、正丁醇萃取物组和乙酸乙酯萃取物组大鼠子宫中PR表达水平与NC组比较分别升高了99.74%、84.92%、88.21%,差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。氯仿萃取物组、乙酸乙酯萃取物组大鼠卵巢中ER表达水平与NC组比较分别降低了60.88%、43.08%,差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;水溶物组大鼠卵巢中ER表达水平与NC组比较升高7.52%,但差异无统计学意义（P>0.05）;大黄水提取物组、正丁醇萃取物组大鼠卵巢中ER表达水平与NC组比较分别降低了30.99%、30.46%,差异均无统计学意义（P>0.05）。氯仿萃取物组大鼠卵巢中PR表达水平与NC组比较升高140.21%,差异有统计学意义（P<0.01）;正丁醇萃取物组、大黄水提取物组大鼠卵巢中PR表达水平与NC组比较分别升高了53.56%、19.16%,差异均无统计学意义（P>0.05）;乙酸乙酯萃取物组、水溶物组大鼠卵巢中PR表达水平与NC组比较分别降低了44.52%、7.67%,差异均无统计学意义（P>0.05）。4对子宫、卵巢组织结构的影响:各萃取物组与NC组相比子宫均出现不同程度的腺体扩张,上皮细胞呈扁平状,部分呈空泡状或高柱状,增生,数量增多,核增大。血管数量增多,扩张呈囊状。间质疏松、水肿。氯仿萃取物组表现最明显,乙酸乙酯萃取物组次之。各萃取物组与NC组比较卵巢中各级卵泡数均减少,黄体数、闭锁卵泡数增多,氯仿萃取物组卵巢中颗粒细胞减少,卵泡内细胞排列紊乱。5对子宫、卵巢超微结构的影响:NC组大鼠子宫内膜上皮细胞微绒毛丰富,腺体细胞丰富,排列整齐,细胞核居中,核膜清晰完整,有较多的分泌细胞。细胞浆内有丰富的细胞器,线粒体、高尔基体、内质网较多,线粒体嵴清晰。大黄水提取物组大鼠子宫内膜微绒毛发生脱落,腺体细胞细胞膜完整,细胞核出现破裂、边集,细胞器减少。氯仿萃取物组大鼠子宫内膜上皮细胞微绒毛几乎完全缺失,腺体细胞数量明显减少,排列紊乱,分泌细胞明显减少,细胞核消失,染色质分散,边集。间质出现空泡。细胞器明显减少,细胞之间出现缝隙。乙酸乙酯萃取物组与氯仿萃取物组相似,正丁醇萃取物组和水溶物组与NC组相似。NC组大鼠卵巢中卵泡颗粒细胞丰富,细胞体积大,形状圆,细胞核完整居中,核膜清晰完整,染色质分布均匀,分泌细胞丰富。细胞浆及间质细胞中细胞器丰富,线粒体较多,线粒体嵴清晰,有较多的高尔基体和内质网。有脂滴散在分布。大黄水提取物组大鼠卵巢颗粒细胞出现核边集,颗粒细胞及间质出现空泡,细胞器减少。氯仿萃取物组大鼠卵巢颗粒细胞数量减少,排列紊乱,细胞核破裂,染色质边集,线粒体减少、水肿、出现空泡,线粒体嵴断裂,细胞之间出现空隙。乙酸乙酯萃取物组与氯仿萃取物组相似。正丁醇萃取物组和水溶物组与NC组相似。结论本实验中所用的大黄水提取物及各种萃取物对子宫、卵巢功能及结构均有一定的损害作用,其损害程度最为显著的是氯仿萃取物,提示氯仿萃取物为大黄产生生殖毒性的主要萃取物。说明大黄对子宫卵巢的毒性部位和成分主要存在氯仿萃取物中。