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众所周知,乙肝病毒是一种在人类中广泛存在的病原体。慢性乙肝病毒感染是造成肝癌发生的一个关键的因素,但是其分子机制还不是很清楚。microRNA介导病毒与宿主细胞之间的相互作用过程中发挥着重要的作用。宿主来源的microRNA对病毒的调控作用主要存在有两个方面：一方面,调控宿主细胞内的基因靶标或病毒的基因来协助病毒的复制。另一方面,诱导mRNA降解和抑制翻译等机制间接地调节宿主细胞和病毒自身的靶基因,参与宿主细胞对病毒侵染的抵御和病毒对宿主的抵抗与逃避。目前有关microRNA与HBV病毒相互调控作用的研究也越来越多。宿主microRNA对HBV复制的调控主要是通过直接或间接方式来调控。当HBV侵染宿主细胞之后,HBV可能会改变宿主细胞内miRNA的表达谱,但是其具体机制也不是很清楚。目前研究表明HBV侵染细胞之后,miRNA的表达谱会发生一些变化。据推测可能是HBV侵染之后激活宿主自身的一些特定转录因子(细胞因子),而这些特定转录因子(细胞因子)则影响miRNA的转录或干扰rniRNA的成熟。本论文的主要研究发现有两个方面：一,发现miR15a直接靶定在HBV所编码的HBp和HBx基因区域来抑制HBV的复制；首先用siRNA的方法敲除miRNA pathway中重要的蛋白因子dicer和ago2之后,发现敲除这两个蛋白因子之后会影响到HBV的复制。同时发现HBV侵染HepG2细胞之后,miRNAme的表达发生一些变化,例如niR-15a, miR-16和miR-let-7a等的表达下调而miR-602, miR-210等的表达是上升的。紧接着我们运用生物信息学的方法预测存在于HBV基因组上microRNA潜在的靶定位点,并运用荧光素酶报告基因的检测方法证实存在于HBV基因组上潜在的miR15a的靶位点是它真正的靶标位点。二,HBV编码的蛋白HBx调节miRNA的表达水平,以及是通过RNA存在的情况下调节miR15a/16的。首先构建好可以表达带有flag标签的HBx蛋白的质粒pcDNA-3.0-HBx,将其转染到HepG2细胞48h之后收集细胞,通过RT以及定量PCR检测了一些microRNA的表达水平,发现miRNA表达的情况和转染含有HBV整个基因组质粒pch9-3091之后检测miRNA表达水平变化所出现的结果是一致。随后继续探究HBx如何使microRNA的表达发生变化,我们发现当HBx以RNA形式存在的时候,也可以使miR-15a,miR-16的表达发生变化。进一步构建相应的一些表达HBx蛋白或只转录产生HBx’s RNA的突变体质粒转染人HepG2细胞48h之后,再检测rnicroRNA的表达,发现表达下调的miR-15a,miR-16的表达是有所回复到和对照组的表达水平。由此可以看出HBx序列上突变的这几个位点是很重要的。由这些实验结果可以推测出HBx很有可能是以RNA存在的形式直接与miR-15a,miR-16相互作用,极有可能是通过碱基互补配对的方式,从而来调控的。这些研究结果对于进一步完善HBV与宿主间miRNA的相互作用机制的深入理解和对HBV的防治提供新的思路与方法。