沙门氏菌属肠杆菌科细菌,其血清型达2600多种,其中鸡白痢、鸡伤寒引起禽类沙门氏菌感染的主要病原菌。沙门氏菌作为家禽体内的常在菌,主要寄生于家禽肠道。沙门氏菌复杂的血清型和较高的感染率对养禽业的危害相当严重。在集约化养鸡场中当鸡群发生鸡沙门氏菌感染时,选择有效的抗微生物药物治疗仍是最主要的防治手段。但抗微生物药物选择不当甚至滥用不但会降低药物防治效果,而且会诱导细菌产生耐药性。为控制沙门氏菌感染,及时准确地对沙门氏菌进行鉴定并分型具有重要现实意义。本试验旨在建立一种鉴别沙门氏菌血清型的四重PCR方法,为临床沙门氏菌的准确分型和鉴定提供一种有效工具,这对沙门氏菌的防控和净化都具有重要意义,并通过对山东地区这四种沙门氏菌血清型的流行规律和耐药情况进行探究,为沙门氏菌的流行情况以及抗生素的合理使用提供参考,因此对抗生素的科学用药具有实际指导意义。本研究通过Genbank数据库、Bioedit和Primer 6软件设计引物,用所建方法分别扩增沙门氏菌和7种非沙门氏菌的目的基因以验证该方法的特异性及可行性。将目的菌株进行增菌培养,校准菌液OD值至108CFU/mL后,进行梯度稀释至101CFU/mL,之后用本试验建立的方法分别扩增每个梯度的混合模板,从而得到该方法的最低检测限。将建立的四重PCR方法用于检测鉴别家禽样品中的沙门氏菌,通过16s rDNA测序方法对临床样品进行菌种鉴定并与所建方法PCR扩增结果相比较,以确定该方法的准确性。结果显示,本试验设计的引物能有效扩增目的基因,扩增非沙门氏菌结果均显示阴性;灵敏性试验结果显示最低可检测到102CFU/mL的细菌浓度。利用该方法检测临床样本,结果显示128份沙门氏菌阳性样本中肠炎沙门氏菌分离率为39%、鸡白痢沙门氏菌分离率为11.7%、伤寒沙门氏菌分离率为2.3%、鼠伤寒沙门氏菌分离率为33%、其他血清型占14%,检测结果和16s rDNA测序结果一致。本研究建立的四重PCR鉴别沙门氏菌的检测方法准确、可靠、特异性强、灵敏度高并且稳定性好,有望成为日后沙门氏菌监测的一种有效手段。采用K-B纸片法对已鉴定的沙门氏菌进行敏感性试验,结果显示,沙门氏菌对阿莫西林、头孢他啶、氨苄西林、甲氧苄啶、头孢噻肟、四环素、壮观霉素以及氧氟沙星的耐药率分别为45%、42%、40%、36%、33%、28%、15%和8%,对恩诺沙星、氟苯尼考、庆大霉素、美罗培南以及多粘菌素的耐药率均为0%。耐药表型的结果表明,长期使用抗生素治疗沙门氏菌病,已导致沙门氏菌对一些抗菌素的敏感性降低并产生一定程度的耐药性。