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目的:随着社会的进步和人民生活水平的提高,冠心病已成为全球范围内威胁人类生命的首要致死性疾病。经皮腔内冠状动脉成形术(percutaneous transluminal coronary angioplasty,PTCA)作为治疗冠心病的主要手段,在临床上得到了越来越广泛的应用,然而介入治疗术后再狭窄的发生在很大程度上影响了其远期效果。对于介入治疗术后再狭窄机制的研究发现,血管内皮细胞过度增生及血管平滑肌细胞(VSMCs)的增殖、迁移是发生再狭窄的主要原因。研究表明,炎性反应在血管再狭窄过程中起重要作用。阐明血管损伤后参与炎性反应的各个炎性因子之间的关系与作用规律,对于血管性疾病的发病机制研究和血管成形术后主要并发症的防治等方面均有重要的意义。本研究通过测定兔腹主动脉球囊扩张后各时间点白细胞介素8(Interleukin-8,IL-8)、白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子 α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和 C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)水平变化情况,探讨兔腹主动脉球囊扩张后炎性因子水平变化的规律,阐明其作用机制,并对干预血管再狭窄这一病理过程提供了新的角度,有必要进行深入的研究。
方法:选取9-14月龄新西兰大白兔16只,全部为雄性动物,体重2.50-3.25kg,实验前均适应性饲养5-7d,均单笼、低脂饲料饲养,由河北医科大学实验动物中心提供,实验后继续单笼、低脂饲料喂养。以上动物随机分为实验组(experiment group)和对照组(control group),每组各 8只动物。以 10g/L 戊巴比妥钠 3.0-3.5ml/kg 耳缘静脉注射麻醉实验动物,常规消毒铺巾后,采用Seldinger技术穿刺股动脉并留置鞘管,经鞘管注入普通肝素200 单位抗凝,沿导引钢丝逆行插入球囊,造影后将球囊定位,置于髂动脉以上2个椎体处,以 405.30~607.95 kPa 压力扩张球囊,同时注射造影剂证实球囊完全扩张堵闭腹主动脉,自近心端缓慢回拉(拉伤长度3-4cm),反复3次,每次扩张时间20秒,间隔15秒,造成球囊扩张拉伤兔腹主动脉。对照组动物术前准备及麻醉方法同实验组,但只进行股动脉穿刺留置鞘管,不进行球囊拉伤。分别于实验前,实验后4小时、1天、1周、2周、4周耳缘静脉采血5ml,以3000r/min离心20min 后,取上清液得血清标本,-80℃冰箱统一保存。4周后处死动物前复查造影,进行病理检查观察组织学变化。通过酶联免疫双抗体夹心法测定兔腹主动脉球囊扩张后各时间点IL-8、IL-6、TNF-α和CRP水平变化情况,探讨兔腹主动脉球囊扩张后炎性因子水平变化的规律,阐明其作用机制。所有数据输入SPSS13.0统计软件包,研究数据中计量资料以(±s)表示,两组间比较使用t检验,计数资料使用χ2检验,相关资料采用相关分析法计算相关系数,以p<0.05为差异有统计学意义。
结果:1.4周后造影检查,发现实验组动物腹主动脉拉伤处出现明显狭窄,而对照组动物无明显变化。病理检查结果:肉眼观察对照组动物动脉柔软、有弹性,颜色粉红均匀,管腔内膜较光滑。实验组动物腹主动脉拉伤处外观粗细不均匀,管壁明显僵硬。取材后见管壁增厚,光镜下形态学观察:对照组兔腹主动脉血管壁内膜、中膜、外膜三层结构明显,内膜完整、无增厚,内皮下无脂质沉积,中膜平滑肌细胞细长呈梭形,细胞核蓝染,同心圆状排列整齐;实验组兔腹主动脉管腔狭窄,内膜明显增厚,中膜平滑肌细胞排列紊乱,单位面积细胞核数量增多。
2.两组动物之间一般情况分析:两组动物月龄、术前体重、术后体重、穿刺径路、术前后血脂水平(包括 TG,TC,LDL-C,HDL-C)等一般情况相比,差异无统计学意义(p>0.05),两组动物具有可比性。
3.两组动物实验前后IL-8等炎性因子水平变化情况:实验前两组动物IL-8、IL-6、TNF-α、CRP 等水平比较,差异无统计学意义。实验组动物球囊损伤后4小时IL-8水平即开始升高,与对照组以及术前水平比较有显著性差异(p<0.01),术后 1天达到峰值水平,持续升高至第4周。IL-6、TNF-α、CRP水平于术后24小时开始升高,IL-6、CRP术后1周达到峰值水平,TNF-α术后2周达到峰值,与对照组以及术前水平比较有显著性差异(p<0.01)。上述炎性因子持续增高4周,均明显高于对照组(p<0.01)。对照组上述炎性因子无此变化趋势。
4.相关性分析:IL-8水平与 IL-6、TNF-α、CRP水平呈正相关,相关系数r分别为0.769,0.673,0.897(p 均<0.05)
结论:1.通过介入方法进行球囊拉伤可成功建立兔腹主动脉狭窄模型;
2.兔腹主动脉球囊扩张拉伤引起炎性反应的发生,炎性因子IL-8、IL-6、TNF、CRP 等水平升高;
3.在升高的炎性因子中,IL-8最先升高,达到峰值时间最短,可能在炎性反应激活的过程中起到了关键的调节作用。