苹果MdHB1基因启动子的克隆及特征分析

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MdHB1是一个转录因子,属于苹果HD-ZipI亚家族的成员,根据先前的报道,MdHB1能够与MdACO1启动子结合,进而调控乙烯生物合成。本试验以‘皇家嘎啦’叶片为试材,克隆MdHB1基因启动子,然后以烟草为材料,利用农杆菌介导的瞬时转化技术来探究苹果MdHB1基因启动子的特性。本试验结果如下:  1、克隆了长度为1057bp的MdHB1基因启动子,利用生物信息学软件对MdHB1基因启动子进行转录起始位点和顺式作用元件的分析,结果显示转录起始位点(TSS)、CAAT BOX、TATA BOX分别位于翻译起始位点(ATG)上游266bp、319bp、308bp的位置。在这一段基因启动子区域内存在响应激素和环境因素的顺式作用元件,如ERE、ABRE、ARE、G-Box等。  2、启动子5,端序列缺失试验表明,当启动子长度为680bp时,活性最低,当启动子长度为266bp时,仍具有较高的启动子活性。5UTR(非编码区域)在基因表达过程中可能起到一个积极的作用。  3、通过农杆菌介导的瞬时转化技术,获得含有长度为1057bp启动子的转基因烟草,在生物和非生物因素的处理下,启动子受到乙烯、黑暗的正调控作用,而脱落酸(ABA)、水杨酸(SA)、假单胞丁香杆菌(DC3000)和机械伤对启动子的正调控作用较微弱,赤霉素(GA)则抑制启动子的活性。  4、乙烯响应元件(距ATG上游576bp)能够响应外源乙烯正调控作用,当外源乙烯处理浓度逐渐增大时,正调控效应逐渐升高达到最大值,然后逐渐降低,500mg L-1乙烯利能最大程度的提升乙烯响应元件活性。
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