【摘 要】
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随着工农业的迅猛发展,土壤重金属污染日益严重。重金属镉(Cadmium)是常见污染物之一,在土壤中以低浓度存在时,便可以对生物体产生极强的毒性,影响农作物的生长发育。大豆(Glycin
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随着工农业的迅猛发展,土壤重金属污染日益严重。重金属镉(Cadmium)是常见污染物之一,在土壤中以低浓度存在时,便可以对生物体产生极强的毒性,影响农作物的生长发育。大豆(Glycine max)是我国重要的经济作物,对镉的积累浓度远高于其他作物,有关大豆吸收和运输镉机制的研究还鲜有报道。本研究通过生物信息学方法在大豆基因组中筛选到GmHMA9(Heavy metal P1B-ATPase9of Glycine max)基因,并对GmHMA9基因和其启动子进行克隆。通过农杆菌介导的大豆毛状根遗传转化体系,获得转GmHMA9基因的转基因材料,采用生物信息学、分子生物学、组织化学分析等方法对GmHMA9基因在大豆抗镉胁迫中的功能进行研究。 GmHMA9是典型的HMA类蛋白,属于P1B型ATPase的Zn亚类。GmHMA9基因序列全长为7208bp,包含9个外显子和8个内含子。转录区共包含3035bp,其中5UTR序列为161bp,3UTR序列为216bp。cDNA序列全长为2658bp,编码885个氨基酸,其启动子区为3040bp。GmHMA9基因在大豆根、茎、叶、子叶四个组织均表达,在根中表达最强,在叶中表达最弱。GmHMA9基因主要在根的成熟区表达,在根尖不表达。GmHMA9基因主要在根的表皮细胞表达,其次为木质部,其余部分不表达或表达较弱。GmHMA9基因表达量受镉胁迫的影响,随着镉胁迫时间的增长其表达量明显增加。过表达GmHMA9基因,能够提高大豆对镉胁迫的耐受浓度和耐受时间,缓解镉对大豆的毒害作用。GmHMA9是与重金属运输相关的膜转运蛋白,具有7个跨膜结构螺旋,定位于液泡膜上。GmHMA9蛋白可能通过将细胞内的镉隔离于液泡内,减少镉对细胞膜系统及其他细胞器中各种生理代谢活动的伤害,从而起到镉毒害的解毒作用。 本论文证明了GmHMA9基因在大豆抗重金属镉胁迫中的解毒作用,讨论了其可能的作用机制,将为大豆中Cd吸收和转运机制的研究提供重要理论依据,也为大豆抗重金属育种提供理论参考和基因资源。
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