【摘 要】
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本研究采用PCR技术从鸡传染性贫血病毒DNA中扩增出VP2和VP3基因,并将二者分别克隆到pMD18-T simple vector中,经测序证实所克隆的VP2和VP3基因与CIAV cux-1标准株相同。并将VP2
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本研究采用PCR技术从鸡传染性贫血病毒DNA中扩增出VP2和VP3基因,并将二者分别克隆到pMD18-T simple vector中,经测序证实所克隆的VP2和VP3基因与CIAV cux-1标准株相同。并将VP2和VP3基因分别亚克隆到真核表达载体pcDNA4.0和pEGFP-N1中,构建了重组真核表达质粒pcDNA4.0-VP2和pEGFP-VP3。将二者各自转染BHK和293T细胞,经Western-blotting证实,转染的真核细胞能够表达VP2蛋白并具有良好的抗原性;经RT-PCR和荧光观察证实,转染的真核细胞能够表达VP3蛋白。
为了分析VP2是否对宿主细胞的增殖有影响,用pcDNA4.0-VP2转染293T和BHK细胞,分别在24 h、48 h、72 h、96 h和120 h后进行细胞计数,与对照组(空载体转染细胞以及未转染的细胞)相比,VP2的瞬时表达对这2种细胞的增殖没有影响,提示鸡传染性贫血病毒的VP2基因可能不影响宿主细胞的分裂周期。为研究VP2对宿主细胞中转录调控因子NF-κB活化的影响,将pcDNA4.0-VP2与NF-κB的活化报告质粒pNF-κB-Luc共转染293T和BHK细胞,检测报告基因——荧光素酶基因的表达情况。结果发现,与空载体pcDNA4.0对照组相比,pcDNA4.0-VP2组的报告基因荧光素酶的表达显著增高,表明VP2的瞬时表达可以活化转录因子NF-κB。
本研究结果表明,鸡传染性贫血病毒VP2基因表达对293T和BHK细胞的增殖没有影响,但可以激活293T和BHK细胞的转录因子NF-κB。为进一步研究CIAV的致病机制奠定了基础。
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