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硒是人和动物必需的微量元素,具有提高机体免疫力、抗癌、抗自由基、延缓衰老、拮抗有毒元素、防治某些地方性流行病等多种功能。许多国家都将日粮补硒作为预防动物缺硒的常规措施。在动物体内,硒存在的主要形式是硒蛋白。多数硒蛋白又是具有重要作用的酶,称之为硒酶。对硒酶活性和基因表达的研究已经获得了许多重要成果,但仍有不少尚未澄清的问题。本文在建立了鸡原代肝细胞无血清培养模型和荧光定量PCR检测方法的基础上,研究了不同浓度的硒卡拉胶（Se-Car）、亚硒酸钠（Na-Se）和硒蛋氨酸（Se-Met）对鸡肝细胞谷胱甘肽过氧化物酶（GPx1）活性及磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶（GPx4）和脱碘酶Ⅰ（IDⅠ）mRNA表达的影响,为不同硒源的作用机理提供理论依据。试验1鸡肝细胞中GPx4和IDⅠmRNA水平荧光定量PCR检测方法的建立根据已知的鸡β-actin、GPx4和IDⅠ基因的mRNA序列,设计并合成3对特异性引物。从鸡肝细胞中抽提总RNA,反转录,合成cDNA,再以cDNA为模板,分别进行3个目的基因片段的PCR（polymerase chain reaction,PCR）扩增。胶回收PCR产物,测定浓度并10倍梯度稀释作为建立荧光定量PCR的标准模板,同时,对引物浓度和退火温度进行优化。结果显示,3对引物各扩增出一条目的带,大小和预期相符合.反应的最佳引物浓度是10 pmol·μL-1,最佳退火温度为58℃。扩增β-actin、GPx4和IDⅠ基因的3对引物的扩增效率分别为93.5%、91.4%和98.4%,且PCR产物的熔解曲线显示单一峰。试验2鸡原代肝细胞分离及无血清培养方法的建立采用胶原酶灌注法,对30-40日龄的白来航鸡进行肝细胞分离,用台盼蓝拒染法计算肝细胞总数和实时存活率。肝细胞以1×106个·ml-1接种于6板,每孔2.5ml,无血清L-15培养基,37℃普通恒温箱培养。观察细胞形态,测定不同培养时间细胞培养基上清液中的乳酸脱氢酶（LDH）活力。结果显示,每个鸡肝脏分离获得的细胞总量为（4.1±0.2）×108个,肝细胞实时存活率为92%±1%;LDH活力在培养后4--96 h之间呈下降趋势,细胞可维持良好的生长状态达6天以上。试验3不同硒源对鸡原代肝细胞GPx1活性的影响肝细胞培养24h后,将三种硒源分别以0（对照）,0.5,1,1.5,2,3,4,5μmol·L-1的浓度（以Se计）加入到培养液中,继续培养24h。测定培养基上清液中LDH活力,细胞内谷胱甘肽（GSH）含量和GPx1活力。结果显示:LDH活力随硒浓度增加而增加,但是当Se-Met在1-3μmol·L-1时,LDH活力低于对照组（P＜0.05）;GSH含量随硒浓度增加先降后升,Se-Car浓度在1.5-2.0μmol·L-1（P＜0.01）、Se-Met浓度在1.0-2.0μmol·L-1（P＜0.01）、Na-Se浓度在1.5μmol·L-1（P＜0.05）时,GSH的浓度与对照组相比显著降低,Se-Car浓度在4.0-5.0μmol·L-1（P＜0.01）、Se-Met浓度在4.0-5.0μmol·L-1（P＜0.05）、Na-Se浓度在3.0-5.0μmol·L-1（P＜0.01）时,GSH浓度与对照组相比显著升高;GPx1活力随硒浓度增加先升后降,当Se-Car和Se-Met浓度为2μmol·L-1、Na-Se浓度为1.5μmol·L-1时,各组GPx1活力达到最大（P＜0.001）,当Se-Car和Se-Met浓度在2-5μmol·L-1区间、Na-Se浓度在1.5-5μmol·L-1区间时,GPx1活力呈下降趋势。结论:一定浓度范围内,Se-Met比Se-Car和Na-Se具有更大的安全范围和更好的抗氧化能力。试验4不同硒源对鸡原代肝细胞IDⅠ及GPx4 mRNA表达的影响试验处理同试验3,然后测定IDⅠ和GPx4 mRNA表达水平。结果显示:三种硒源添加组IDⅠmRNA表达水平均显著高于对照（P＜0.05）,随硒浓度增加IDⅠmRNA表达水平下降,下降幅度Se-Met＜Na-Se＜Se-Car。三种硒源添加组GPx4 mRNA表达水平均极显著低于对照组（P＜0.001）,随硒浓度增加GPx4 mRNA表达水平下降,下降幅度Se-Met＜Se-Car＜Na-Se。结论:一定浓度范围内,三种硒源均可显著提高IDⅠmRNA表达水平,Se-Met在较宽的浓度范围内可使IDⅠmRNA在高水平维持,Na-Se和Se-Car次之;三种硒源均可使GPx4 mRNA表达水平显著下降,下降幅度Se-Met更小。