【摘 要】
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神经营养因子是一类能够促进神经细胞存活、生长、分化的多肽分子,在神经系统发育、分化和损伤修复过程中具有重要作用.该论文就hNTN在原核和真核系统的表达、纯化及生物学活
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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神经营养因子是一类能够促进神经细胞存活、生长、分化的多肽分子,在神经系统发育、分化和损伤修复过程中具有重要作用.该论文就hNTN在原核和真核系统的表达、纯化及生物学活性的测定等进行了系统详细的研究.首先,构建了含有羟胺切割位点的hNTN融合蛋白表达载体,在大肠杆菌中获得了NTN的高效表达,经羟胺切割并进行了纯化,获得了纯度达90﹪的重组hNTN蛋白.其次,根据公布的hNTN成熟蛋白氨基酸顺序,选择毕赤酵母偏爱的密码子,人工合成hNTN的成熟蛋白编码基因,构建hNTN酵母分泌型表达载体,在毕赤酵母中获得稳定、高效的分泌表达,表达量达100mg/L,并建立了表达产物的分离、纯化工艺,经过CM-sepharose离子交换层析和Superdex-75凝胶过滤纯化,可以获得纯度达95﹪的重组NTN.最后,对重组hNTN的活性进行鉴定.实验表明,大肠杆菌和毕赤酵母表达的hNTN在体外能促进培养的鸡胚背根神经节长出神经突起并能促使培养的大鼠胚胎中脑多巴胺能神经元的存活.动物试验表明,重组hNTN在大鼠面神经损伤模型中能促进而神经元的存活,在MPTP诱导的恒河猴帕金森氏病模型体内能对抗MPTP的毒性并能保护和修复中脑黑质多巴胺能神经元.
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